乙酰肝素酶基因靶向特异性RNA干扰重组表达载体的构建及筛选

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:angieho
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目的构建对人乙酰肝素酶(HPA)基因有特异性抑制作用的短发夹状RNA表达载体。方法根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按照shRNA设计原则设计5对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pGPU6/GFP/Neo载体中,酶切鉴定和测序验证阳性克隆。用脂质体转染入MDA-MB-231细胞,分别以荧光定量PCR、Western blot分析其对HPA在mRNA水平和蛋白质水平上表达的影响。结果经酶切、测序鉴定均证实重组质粒构建成功。在构建的5个载体中,HPSE-1组及HPSE-5组中MD
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