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目的观察不同血清微环境中培养的细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer,CIK)CD4+/CD8+和Th1/Th2的动态改变,探讨最有利于恢复肿瘤患者CD4+/CD8+和Th1/Th2平衡的CIK细胞培养血清微环境和最适CIK细胞回输时机。方法将3例不同患者来源的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)用含10%肿瘤患者自体抗凝血浆培养基(ZT)在体外诱导培养成CIK细胞,并设含10%胎牛血清培养基(FBS)和无血清培养基(GT)作为对照。连续记录CIK细胞在三组血清微环境中的增殖情况,并分别收集培养第0、7、14和21天的CIK细胞和细胞培养上清。MTT法检测CIK细胞毒活性。流式细胞术检测CIK细胞CD3+、CD4+和CD8+免疫表型。ELISA法检测细胞培养上清中Th1和Th2优势细胞因子IFN-γ和IL-13浓度,二者浓度比即为Th1/Th2比值。结果 (1)CIK细胞增殖情况:三个血清微环境组间无显著差异。(2)CIK细胞肿瘤杀伤活性:培养至第7、14和21天的CIK细胞对K562的杀伤活性在不同血清微环境组依次为:ZT:(79.95±12.23)%、(93.86±2.38)%、(66.34±7.54)%,FBS:(71.02±14.79)%、(83.72±5.63)%、(58.37±7.57)%,GT:(40.92±4.66)%、(52.61±8.05)%、(41.43±5.25)%,CIK细胞肿瘤杀伤活性在同一血清组不同时间点间比较结果为ZT和FBS组在第14天均显著高于第7天和第21天(P<0.01);GT组在不同时间点间无显著差异。在不同血清微环境组相同时间点间比较的结果发现在第7、14和21天三个时间点,ZT和FBS组均显著高于GT组(P<0.01)。(3)CIK细胞中CD4+/CD8+的动态改变:同一血清组不同时间点间的比较结果显示在第0天,肿瘤患者来源的PMBC CD4+/CD8+倒置,ZT组CD4+/CD8+在第7天升高至2.25±1.67,显著高于第0天(P<0.05),但随即在第14天和第21天又恢复倒置现象;FBS组CD4+/CD8+一直维持倒置现象,并在第21天降低至0.04±0.55,极显著低于第0天(P<0.01);GT组CD4+/CD8+亦一直维持倒置现象,且在4个时间点间无显著差异。在相同的时间点不同血清微环境组间比较的结果显示在第7天,CD4+/CD8+比例在ZT组显著高于FBS和GT组(P<0.05);在第14天和第21天,三组间无显著差异。(4)CIK细胞中Th1/Th2的动态改变:CIK细胞Th1/Th2在相同血清组不同时间点间比较发现ZT和GT组在4个时间点一直维持Th1/Th2倒置,且4个时间点间无显著差异;FBS组Th1/Th2在第7天和第14天均极显著高于第0天(P<0.01),Th1/Th2倒置现象被纠正,但在第21天又再次出现Th1/Th2倒置。在不同血清微环境组相同时间点间比较发现在第7天和第14天,FBS组Th1/Th2极显著高于ZT和GT组(P<0.01)。结论不同血清微环境培养的CIK细胞CD4+/CD8+和Th1/Th2均呈动态改变趋势。提示在临床进行CIK细胞治疗时,应综合考虑患者的自身免疫状态、所采用的细胞培养血清微环境及CIK细胞培养过程中CD4+/CD8+和Th1/Th2的动态改变,制定个性化的治疗方案。