小鼠β2m基因打靶载体的构建及序列分析

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目的采用分子生物学技术,构建小鼠β2m基因打靶载体,为下一步进行胚胎干细胞基因敲除、建立β2m基因缺陷型干细胞奠定基础.方法通过设计和合成引物,经PCR从小鼠β2m-pSV2ΔHXgpt 基因组克隆分别扩增小鼠β2m的4.2kb和0.8kb片段作为同源臂,将其分别插入载体pPNT的neo基因两侧,构建小鼠β2m基因替换型打靶载体pPNT-β2m.结果经过PCR、限制性酶酶切鉴定,以及DNA序列分析,证实此两条同源臂为包含小鼠β2m前三个外显子在内的基因片段,证明载体构建成功.结论 PCR法构建基因打靶载体
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