【摘 要】
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目的:建立一种简便、特异的对二氢嘧啶脱氢酶基因DPYD*9进行等位基因分型的方法.方法:以DPYD基因为靶合成含突变位点的野生型引物WF、突变型引物TF和共同的下游引物R,用DNA荧
【机 构】
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军事医学科学院附属医院,军事医学科学院放射与辐射医学研究所
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目的:建立一种简便、特异的对二氢嘧啶脱氢酶基因DPYD*9进行等位基因分型的方法.方法:以DPYD基因为靶合成含突变位点的野生型引物WF、突变型引物TF和共同的下游引物R,用DNA荧光嵌入染料SYBR Green Ⅰ进行荧光PCR扩增,对产物进行溶解曲线分析以确定基因型;同时优化了引物浓度,分析其灵敏度并与普通PCR进行了比较,对20份PCR产物进行了验证.结果与结论:以野生型基因组为模板时,WF和R组合有荧光响应,而TF和R组合无荧光响应;当以突变型基因组为模板时,TF和R组合有荧光响应,而WF和R组合无荧光响应.两者Ct 值均为24,Tm值均为83oC.优化引物浓度为0.25 μmol/L,荧光PCR可分出10个模板拷贝数的基因型,而普通PCR只能区分模板为8.0×102拷贝数的基因型.PCR产物测序证实荧光PCR法与直接测序结果一致.该方法能准确快速地区分DPYD*9的基因型,敏感性和特异性强.
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