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作者单位：161000 齐齐哈尔医学院第一附属医院
通讯作者：田淑梅
【摘要】 目的 生物微矩阵芯片技术检测患者血清中幽门螺杆菌（Hp）毒素相关蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）及尿素酶抗体（Ure），快速提供胃十二指肠疾病诊断的依据。方法 对100例胃病患者留取血清，用生物微矩阵芯片方法检测。结果 CagA阳性为55%，VacA阳性为29%，Ure阳性为16%。结论 芯片法在幽门螺杆菌感染的诊断、筛查和防治中具有重要意义。
【关键词】 生物微矩阵芯片； 幽门螺杆菌； 空泡毒素； 毒素相关蛋白； 尿素酶
胃十二指肠疾病与幽门螺杆菌（Helicobacter Pyloyi,Hp）感染的关系密切，胃黏膜或胃液中幽门螺杆菌的检测可作为诊断和治疗的重要依据。Hp感染呈全球性分布，与消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及MAK 淋巴瘤的发生率密切相关［1］。在我国人群中，幽门螺杆菌的感染率已达50%～60%［2］,西方国家大约为30%～50%。在中国，其感染率的比例随年龄增长而提高。自从1983年Warren等人首次发现Hp以来，国内外关于Hp的研究甚快，Hp现已被公认为是上消化道疾病的重要因素。芯片法检测幽门螺杆菌操作简单，样品用量少，具有快速、准确、 特异性高等优点。
1 材料和方法
1.1 试剂与仪器 生物芯片检测仪，批号：LE-01-B，西安联尔生物技术有限公司提供。幽门螺杆菌蛋白芯片检测试剂，批号：SXA120401，由西安联尔生物技术有限公司提供。
1.2 标本 随机收集本院2010年8月胃病患者的血清样本100例，用生物芯片检测仪，以上标本均排除溶血和脂血。
1.3 方法 幽门螺杆菌蛋白芯片检测步骤如下：（1）在芯片上片盒窗口内滴加4滴试剂A，使膜表面完全浸湿；（2）待完全渗入后，室温放置1 min，加待检血清100 μl；（3）待血清完全渗入后，再滴加6滴试剂B；（4）待试剂B完全渗入后，滴加10滴试剂C；（5）待试剂C完全渗入后，最后滴加6滴试剂D；（6）反应完毕后30 min内，将芯片放入芯片阅读系统进行分析。
2 结果
2.1 在100例胃病患者中，蛋白芯片法检测出CagA阳性为55%，VacA阳性为29%，Ure阳性为16%。
2.2 CagA（+），VacA（+）， Ure（+）三者都阳性属于Ⅰ型Hp感染，毒性强，与十二指肠炎、十二指肠溃疡及胃癌的发生密切相关，可能正处在发病期应立即检查治疗。
2.3 CagA（+），VacA（-）， Ure（+）或CagA（-），VacA（+）， Ure（+），其中两者阳性属于中间型Hp感染。毒性较强，与消化性溃疡等密切相关，部分功能性消化不良亦与之相关。发病概率较大，应积极配合临床治疗，小心保养胃肠道。
2.4 CagA（-），VacA（-）， Ure（+）属于Ⅱ型Hp感染。毒性弱，主要与慢性浅表性胃炎的发生相关，可观察治疗，注意保养胃部。
2.5 CagA（-），VacA（+），Ure（-）或CagA（+），VacA（+）， Ure（-）比例较低，人群中较为少见，建议积极观察，定期复查。
2.6 CagA（-），VacA（-）， Ure（-），无Hp感染。
3 讨论
3.1 细胞毒素相关蛋白A（Cytotoxin associated gene A，CagA） CagA蛋白具有很强的免疫原性，能诱导宿主胃黏膜局部产生多种细胞因子，尤其是IL-8，进而通过促进中性粒细胞的聚集和活化启动炎症过程。在胃黏膜表面，所有消化道溃疡的患者和60%的功能性消化不良患者均产生CagA抗体，血清中检测到CagA为幽门螺杆菌感染的一个高度特异性指标。CagA与幽门螺杆菌毒力呈高度相关，十二指肠溃疡患者分离的菌珠90%呈CagA阳性，而浅表性胃炎患者CagA阳性仅为50%～60%，100例胃病患者血清中CagA阳性占55%，与文献资料相符。
3.2 毒素A蛋白（Vacuolating cytotoxin A，VacA） VacA阳性为29%，VacA因其可致细胞空泡变性而得名，与消化性溃疡密切相关。在小鼠动物模型中，纯化的VacA能诱导小鼠形成胃溃疡。CagA和VacA抗体的联合检测，有利于幽门螺杆菌毒珠和非毒珠的分型，从而判断患者的感染类型和预后。
3.3 尿素酶（Ure） Ure阳性为16%，尿素酶是幽门螺杆菌主要抗原之一，所有的野生型幽门螺杆菌均产生尿素酶。它可以引起患者产生IgG和IgA，检测血清中相应抗体可作为幽门螺杆菌感染的依据之一。
综上所述，幽门螺杆菌是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素，与胃癌的发生密切相关［3～5］。我国人群感染率高达50%～80%，防治任务十分艰巨。幽门螺杆菌蛋白芯片检测系统利用基因重组技术、斑点免疫渗滤技术和微阵列技术，为快速、方便、准确地检测幽门螺杆菌提供了一个科学先进的方法和手段，是幽门螺杆菌检测快速诊断的一大突破。对Hp毒素抗体的测定主要是采用ELISA方法和免疫印迹法，但其操作繁琐费时，往往不能满足临床的需要。生物芯片的概念来自计算机芯片，进展迅速。与传统的试验方法相比，生物芯片具有高通量、大规模、高度并行性、快速高效及高灵敏度的特点。蛋白芯片研究的对象是蛋白质，其原理是对固相载体进行特殊的化学处理，再将已知的蛋白分子固定其上（如酶、抗原、抗体、受体等）。根据这些生物分子的特性，捕获能与之特异性结合的待测蛋白（存在于血清、血浆、间质液、尿等），经洗涤、纯化，再进行确认和生化分析。幽门螺杆菌蛋白芯片检测系统是对传统的免疫学检测手段的发展，在幽门螺杆菌感染的诊断、筛查和防治中具有重要意义，是一种值得推广的新型检测技术。
参 考 文 献
［1］ 刘晓峰，尚瑞莲，孙自勤.幽门螺杆菌研究历程的启示.医学与哲学，2006,27（1）:69-70.
［2］ 陈颧珠.内科学.第4版.北京:人民卫生出版，2001：1738.
［3］ 童明宏,孙晨光.幽门螺杆菌感染及其毒力因子和胃十二指肠疾病关系的研究.上海医学检验杂志,2002，17（2）:96-98.
［4］ 童明宏,孙晨光.幽门螺杆菌感染、P53基因突变与胃癌的相关性研究.上海医学检验杂志,2003，18（5）:393-395.
［5］ Hoda M. Helicobacter pylori in dental workers: A seroepide miology study.Am J Gastroentero,1992，87（12）:1728-1731.
（收稿日期：2011-04-01）
（本文编辑：陈丹云）
通讯作者：田淑梅
【摘要】 目的 生物微矩阵芯片技术检测患者血清中幽门螺杆菌（Hp）毒素相关蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）及尿素酶抗体（Ure），快速提供胃十二指肠疾病诊断的依据。方法 对100例胃病患者留取血清，用生物微矩阵芯片方法检测。结果 CagA阳性为55%，VacA阳性为29%，Ure阳性为16%。结论 芯片法在幽门螺杆菌感染的诊断、筛查和防治中具有重要意义。
【关键词】 生物微矩阵芯片； 幽门螺杆菌； 空泡毒素； 毒素相关蛋白； 尿素酶
胃十二指肠疾病与幽门螺杆菌（Helicobacter Pyloyi,Hp）感染的关系密切，胃黏膜或胃液中幽门螺杆菌的检测可作为诊断和治疗的重要依据。Hp感染呈全球性分布，与消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及MAK 淋巴瘤的发生率密切相关［1］。在我国人群中，幽门螺杆菌的感染率已达50%～60%［2］,西方国家大约为30%～50%。在中国，其感染率的比例随年龄增长而提高。自从1983年Warren等人首次发现Hp以来，国内外关于Hp的研究甚快，Hp现已被公认为是上消化道疾病的重要因素。芯片法检测幽门螺杆菌操作简单，样品用量少，具有快速、准确、 特异性高等优点。
1 材料和方法
1.1 试剂与仪器 生物芯片检测仪，批号：LE-01-B，西安联尔生物技术有限公司提供。幽门螺杆菌蛋白芯片检测试剂，批号：SXA120401，由西安联尔生物技术有限公司提供。
1.2 标本 随机收集本院2010年8月胃病患者的血清样本100例，用生物芯片检测仪，以上标本均排除溶血和脂血。
1.3 方法 幽门螺杆菌蛋白芯片检测步骤如下：（1）在芯片上片盒窗口内滴加4滴试剂A，使膜表面完全浸湿；（2）待完全渗入后，室温放置1 min，加待检血清100 μl；（3）待血清完全渗入后，再滴加6滴试剂B；（4）待试剂B完全渗入后，滴加10滴试剂C；（5）待试剂C完全渗入后，最后滴加6滴试剂D；（6）反应完毕后30 min内，将芯片放入芯片阅读系统进行分析。
2 结果
2.1 在100例胃病患者中，蛋白芯片法检测出CagA阳性为55%，VacA阳性为29%，Ure阳性为16%。
2.2 CagA（+），VacA（+）， Ure（+）三者都阳性属于Ⅰ型Hp感染，毒性强，与十二指肠炎、十二指肠溃疡及胃癌的发生密切相关，可能正处在发病期应立即检查治疗。
2.3 CagA（+），VacA（-）， Ure（+）或CagA（-），VacA（+）， Ure（+），其中两者阳性属于中间型Hp感染。毒性较强，与消化性溃疡等密切相关，部分功能性消化不良亦与之相关。发病概率较大，应积极配合临床治疗，小心保养胃肠道。
2.4 CagA（-），VacA（-）， Ure（+）属于Ⅱ型Hp感染。毒性弱，主要与慢性浅表性胃炎的发生相关，可观察治疗，注意保养胃部。
2.5 CagA（-），VacA（+），Ure（-）或CagA（+），VacA（+）， Ure（-）比例较低，人群中较为少见，建议积极观察，定期复查。
2.6 CagA（-），VacA（-）， Ure（-），无Hp感染。
3 讨论
3.1 细胞毒素相关蛋白A（Cytotoxin associated gene A，CagA） CagA蛋白具有很强的免疫原性，能诱导宿主胃黏膜局部产生多种细胞因子，尤其是IL-8，进而通过促进中性粒细胞的聚集和活化启动炎症过程。在胃黏膜表面，所有消化道溃疡的患者和60%的功能性消化不良患者均产生CagA抗体，血清中检测到CagA为幽门螺杆菌感染的一个高度特异性指标。CagA与幽门螺杆菌毒力呈高度相关，十二指肠溃疡患者分离的菌珠90%呈CagA阳性，而浅表性胃炎患者CagA阳性仅为50%～60%，100例胃病患者血清中CagA阳性占55%，与文献资料相符。
3.2 毒素A蛋白（Vacuolating cytotoxin A，VacA） VacA阳性为29%，VacA因其可致细胞空泡变性而得名，与消化性溃疡密切相关。在小鼠动物模型中，纯化的VacA能诱导小鼠形成胃溃疡。CagA和VacA抗体的联合检测，有利于幽门螺杆菌毒珠和非毒珠的分型，从而判断患者的感染类型和预后。
3.3 尿素酶（Ure） Ure阳性为16%，尿素酶是幽门螺杆菌主要抗原之一，所有的野生型幽门螺杆菌均产生尿素酶。它可以引起患者产生IgG和IgA，检测血清中相应抗体可作为幽门螺杆菌感染的依据之一。
综上所述，幽门螺杆菌是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素，与胃癌的发生密切相关［3～5］。我国人群感染率高达50%～80%，防治任务十分艰巨。幽门螺杆菌蛋白芯片检测系统利用基因重组技术、斑点免疫渗滤技术和微阵列技术，为快速、方便、准确地检测幽门螺杆菌提供了一个科学先进的方法和手段，是幽门螺杆菌检测快速诊断的一大突破。对Hp毒素抗体的测定主要是采用ELISA方法和免疫印迹法，但其操作繁琐费时，往往不能满足临床的需要。生物芯片的概念来自计算机芯片，进展迅速。与传统的试验方法相比，生物芯片具有高通量、大规模、高度并行性、快速高效及高灵敏度的特点。蛋白芯片研究的对象是蛋白质，其原理是对固相载体进行特殊的化学处理，再将已知的蛋白分子固定其上（如酶、抗原、抗体、受体等）。根据这些生物分子的特性，捕获能与之特异性结合的待测蛋白（存在于血清、血浆、间质液、尿等），经洗涤、纯化，再进行确认和生化分析。幽门螺杆菌蛋白芯片检测系统是对传统的免疫学检测手段的发展，在幽门螺杆菌感染的诊断、筛查和防治中具有重要意义，是一种值得推广的新型检测技术。
参 考 文 献
［1］ 刘晓峰，尚瑞莲，孙自勤.幽门螺杆菌研究历程的启示.医学与哲学，2006,27（1）:69-70.
［2］ 陈颧珠.内科学.第4版.北京:人民卫生出版，2001：1738.
［3］ 童明宏,孙晨光.幽门螺杆菌感染及其毒力因子和胃十二指肠疾病关系的研究.上海医学检验杂志,2002，17（2）:96-98.
［4］ 童明宏,孙晨光.幽门螺杆菌感染、P53基因突变与胃癌的相关性研究.上海医学检验杂志,2003，18（5）:393-395.
［5］ Hoda M. Helicobacter pylori in dental workers: A seroepide miology study.Am J Gastroentero,1992，87（12）:1728-1731.
（收稿日期：2011-04-01）
（本文编辑：陈丹云）