急性脊髓损伤大鼠血管重构与炎症反应的相关性研究

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jyj910
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目的 探讨大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后局部血管重构与炎症反应的相关关系,评估不同程度SCI的组织学改变.方法 成年雌性SD大鼠116只,随机分为4组(n=29).假手术组仅切除椎板暴露脊髓,不进行撞击;轻、中、重度损伤组以标准化的MASCIS脊髓撞击器,分别以12.5、25.0、50.0 mm高度撞击脊髓,建立急性SCI模型.造模后12、24h及3、7、28d取材,行RECA1和CD68免疫荧光双染色并定量分析阳性面积比,统计分析大鼠内皮细胞抗原1 (rat endothelial cell antigen 1,RECA1)和CD68表达相关性;术后28 d免疫荧光双染色定性分析神经微丝(neurofilament-H,NF-H)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达情况.造模后12、24 h及3 d ELISA检测脊髓TNF-α、IL-1β和IL-6水平,并统计分析与微血管密度(RECA1)的相关性;12、24 h及3、7、28 d行HE染色以及28 d行尼氏体染色,评估组织结构及神经元破坏.结果 免疫荧光染色显示,RECA1阳性面积比中度损伤组最大,之后依次为轻度损伤组、重度损伤组,假手术组最小;组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).CD68阳性面积比重度损伤组最高,之后依次为中度损伤组、轻度损伤组,假手术组最低;除24 h、28 d轻度损伤组和中度损伤组比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).各时间点假手术组SCI相应区域RECA1和CD68表达无相关(P>0.05).SCI后12、24 h,轻、中度损伤组内RECA1和CD68表达成正相关(P<0.05),重度损伤组二者无相关(P>0.05).3d时轻、中、重度损伤组以及7d时重度损伤组RECA1和CD68表达均无相关(P>0.05);7d时轻、中度损伤组及28 d时轻、中、重度损伤组均成负相关(P<0.05).随着损伤程度的加重,轻、中、重度损伤组轴突连续性中断逐渐加重、短缩甚至融合成团且数量逐渐减少;胶质细胞数量减少,形态渐不规则且胶质瘢痕致密.ELISA检测显示,假手术组各时间点TNF-ct、IL-1β和IL-6水平均低于其他3组(P<0.05);除12h时轻、中度损伤组IL-1β水平差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各时间点各组炎症因子水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05).3种炎症因子与SCI区域微血管密度相关(P<0.05).组织学观察显示,SCI后脊髓组织的破坏与损伤程度相关,重度损伤组组织肿胀、出血及大量炎症细胞浸润,至后期空洞形成,灰、白质界限完全消失,正常神经元结构几乎不可见.结论 轻、中度SCI后,急性期微血管密度与炎症反应均随损伤程度加大而增加.随着时间推移,远期不同程度SCI区域微血管密度与炎症反应均成负相关;SCI损伤程度越高,炎症反应越明显,组织破坏越严重.
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