本试验旨在建立家兔空肠上皮细胞的体外分离培养方法,为进一步研究外源物质对家兔小肠上皮结构功能的影响及其作用机制提供体外模型。试验以新生新西兰白兔(1~3日龄)空肠为研究对象,利用由链霉蛋白酶E、胶原酶Ⅳ和二硫苏糖醇组成的混合消化液消化空肠组织,通过2%山梨醇密度梯度离心来富集隐窝细胞团。运用相差消化法和差速贴壁法纯化家兔空肠上皮细胞,并从形态学观察、碱性磷酸酶染色、细胞角蛋白8免疫荧光染色和肠上皮细胞标志物基因表达分析4个方面鉴定家兔空肠上皮细胞。结果表明:应用链霉蛋白酶E、胶原酶Ⅳ和二硫苏糖醇混合消化液可获得大量的细胞团,细胞团12 h贴壁并向周围辐射生长,生长的细胞呈典型的三角形或多角形,5~7 d融合成片,呈单层生长、互不重叠;原代细胞能够进行传代、纯化;经碱性磷酸酶染色和细胞角蛋白8免疫荧光染色均呈阳性;可表达肠上皮细胞标志蛋白(脂肪酸结合蛋白2、肠肽酶、E-钙黏蛋白、紧密连接蛋白-4)的基因。以上结果表明,本试验成功建立了家兔空肠上皮细胞的体外分离培养方法。