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目的
建立快速鉴别羊种布鲁菌1、2、3型的基因分型方法。
方法根据羊种布鲁菌标准参考菌株16M RpoB基因的单核苷酸多态性和羊种布鲁菌基因组中串联重复序列(tandem repeat sequence,TRS)Bru42基因的差异,分别设计引物,建立鉴别羊种布鲁菌标准参考菌株的RpoB-PCR和TRS-PCR方法,用建立的方法对临床分离的羊种布鲁菌进行鉴别,并与常规生物分型方法进行比较。
结果RpoB-PCR和TRS-PCR对羊种布鲁菌标准参考菌株(生物型1、2、3型)的鉴定结果与常规鉴定方法结果一致。51株临床分离羊种布鲁菌,RpoB-PCR的鉴别结果显示,50株[包括1(17株)、2(3株)、3(30株)生物型]羊种菌均鉴别为RpoB-2基因型,仅1株羊种1型菌鉴别为RpoB-3基因型。生物型相同的标准参考菌株与临床分离菌株,基因型鉴定结果不完全一致。TRS-PCR的鉴别结果显示,51株羊种菌均鉴别为羊种2型布鲁菌(TRS-2基因型)。
结论羊种布鲁菌生物型与基因型未见明显关联,羊种布鲁菌分离株与标准参考菌株的RpoB基因存在显著差异,Bru42不能用于临床分离羊种布鲁菌的基因分型。