观察微小RNA(miRNA,miR)-188-5p在前列腺癌中的表达和对前列腺癌细胞增殖和转移的生物学影响。
方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-188-5p在前列腺癌组织和前列腺癌细胞中的表达。将miR-188-5p mimic利用Lipfectamine 2000转染至前列腺癌细胞,通过软琼脂细胞克隆形成实验、前列腺癌细胞侵袭和迁移实验研究前列腺癌细胞生物功能的改变。利用生物信息学软件miRanda预测miR-188-5p的靶基因。采用双荧光素酶报告实验验证miR-188-5p对靶基因的直接调控。
结果miR-188-5p mRNA水平在前列腺癌组织中与前列腺癌旁组织和前列腺增生组织比较表达下调(0.996±0.024、0.990±0.094、0.385±0.031),差异有统计学意义(P<0.05)。miR-188-5p mRNA水平在LNCaP、DU145和PC-3细胞中较RWPE-1明显下降(1.022±0.012、0.409±0.034、0.358±0.024、0.255±0.018),且差异有统计学意义(P<0.01)。LNCaP和PC-3细胞中miR-188-5p mimic转染组细胞的体外克隆形成能力明显低于空白对照组(21±5、47±3;25±4、51±5),差异有统计学意义(P<0.01)。在细胞侵袭和迁移实验中,miR-188-5p mimic转染组PC-3和LNCaP细胞到达对侧的迁移细胞数明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。利用生物信息学软件miRanda预测溶酶体相关4次跨膜蛋白质β(LAPTM4B)基因是miR-188-5p可能作用的靶基因。双荧光素酶报告实验确定miR-188-5p与LAPTM4B之间的直接调控关系。
结论miR-188-5p在前列腺癌组织和细胞中表达显著下调,过表达miR-188-5p可以抑制前列腺癌细胞的增殖和转移能力。miR-188-5p可能通过作用靶基因LAPTM4B参与调控前列腺癌的生长和转移。