探讨富氢水对乙醇诱导急性胃损伤的保护作用及其机制。
方法采用实验研究方法。40只昆明小鼠按随机数字表法分为正常对照组(0.01 mL/g生理盐水+0.03 mL/g生理盐水)、单独富氢水组(0.01 mL/g生理盐水+0.03 mL/g饮用富氢水)、乙醇造模组(0.01 mL/g 56°酒精饮品+0.03 mL/g生理盐水)和富氢水治疗组(0.01 mL/g 56°酒精饮品+0.03 mL/g饮用富氢水),每组10只小鼠。每天灌胃2次,连续灌胃7 d。检测指标:(1)胃溃疡指数测定。(2)胃组织病理学检查。(3)检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。(4)检测胃组织中SOD和MDA的表达水平。(5)免疫组织化学染色检测小鼠胃组织中凋亡因子caspase-3、bax、caspase-9、fas和caspase-8的蛋白表达水平。(6)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测小鼠胃组织中凋亡因子caspase-3、bax、caspase-9、fas和caspase-8的mRNA相对表达水平。正态分布的计量资料以
±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验。
(1)胃溃疡指数测定:正常对照组、单独富氢水组、乙醇造模组、富氢水治疗组小鼠胃黏膜损伤指数分别为0、0、10.40±1.64、3.92±0.23,4组比较,差异有统计学意义(F=175.050,P<0.05);乙醇造模组分别与正常对照组和富氢水治疗组比较,差异均有统计学意义(t=19.835,12.352,P<0.05)。(2)胃组织病理学检查:①胃组织大体标本:正常对照组及单独富氢水组小鼠胃黏膜完整光滑,未见糜烂、溃疡及炎症。乙醇造模组小鼠部分胃黏膜糜烂、溃疡损伤面积大,程度重;与乙醇造模组小鼠比较,富氢水治疗组小鼠胃黏膜损伤面积减少。②胃组织病理学检查结果显示:正常对照组及单独富氢水组小鼠胃黏膜表面完整。与正常对照组比较,乙醇造模组小鼠部分胃黏膜表面上皮变性受损。富氢水治疗组小鼠与乙醇造模组小鼠比较,胃黏膜坏死变性程度和炎性细胞浸润程度均减轻。(3)血清中SOD、MDA、IL-6、TNF-α的表达水平:正常对照组、单独富氢水组、乙醇造模组、富氢水治疗组小鼠血清SOD分别为(70±6)U/mL、(74±4)U/mL、(101±4)U/mL、(115±5)U/mL,MDA分别为(7.52±0.23)μmol/L、(7.61±0.91)μmol/L、(16.95±0.66)μmol/L、(14.02±0.58)μmol/L,SOD/MDA分别为9.40±1.07、9.91±1.55、5.99±0.17、8.23±0.32,IL-6分别为(6.3±1.8)ng/L、(5.1±1.6)ng/L、(19.2±4.9)ng/L、(7.1±1.8)ng/L,4组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=97.405,269.950,16.486,25.663,P<0.05);TNF-α分别为(53±14)ng/L、(67±17)ng/L、(52±13)ng/L、(58±21)ng/L,4组比较,差异无统计学意义(F=0.862,P>0.05)。(4)胃组织中SOD和MDA的表达水平:正常对照组、单独富氢水组、乙醇造模组、富氢水治疗组小鼠胃组织中SOD分别为(93±18)U/mL、(93±13)U/mL、(121±31)U/mL、(143±26)U/mL,MDA分别为(7.90±1.72)μmol/L、(6.96±1.49)μmol/L、(17.10±4.88)μmol/L、(7.31±1.58)μmol/L,SOD/MDA分别为12.48±4.54、13.83±3.40、7.88±3.70、20.00±4.68,4组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=5.463,15.051,7.388,P<0.05)。(5)胃组织中凋亡相关蛋白的表达情况:免疫组织化学染色检测结果显示:正常对照组、单独富氢水组、乙醇造模组、富氢水治疗组小鼠胃组织中caspase-3蛋白表达水平分别为0.065 5±0.003 7、0.065 7±0.002 7、0.330 7±0.017 3、0.096 7±0.003 0,bax蛋白表达水平分别为0.065 7±0.003 0、0.064 9±0.003 0、0.335 4±0.033 3、0.084 8±0.001 7,fas蛋白表达水平分别为0.225 4±0.024 3、0.246 0±0.022 3、0.397 0±0.028 5、0.375 0±0.035 6,4组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=1 004.222,309.171,48.555,P<0.05);caspase-9蛋白表达水平分别为0.049 2±0.000 4、0.047 9±0.002 0、0.047 0±0.003 7、0.048 7±0.000 8,caspase-8蛋白表达水平分别为0.151 5±0.010 2、0.154 0±0.013 5、0.157 2±0.006 2、0.153 9±0.006 3,4组上述指标比较,差异均无统计学意义(F=0.998,0.297,P>0.05)。(6)胃组织凋亡相关因子mRNA的表达情况:RT-PCR检测结果显示:正常对照组、单独富氢水组、乙醇造模组、富氢水治疗组小鼠胃组织中caspase-3 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、0.72±0.43、3.19±0.87、0.49±0.16,bax mRNA表达水平分别为1.00±0.00、0.66±0.26、1.58±0.76、0.69±0.25,caspase-9 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、1.57±0.31、3.04±1.15、2.98±0.85,fas mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、0.50±0.19、2.84±0.98、0.53±0.24,4组上述指标比较,差异均有统计学意义(F=32.106,5.038,9.706,23.387,P<0.05);caspase-8 mRNA相对表达水平分别为1.00±0.00、1.50±0.60、1.36±0.34、1.32±0.43,4组比较,差异无统计学意义(F=1.337,P>0.05)。
结论富氢水可以减轻乙醇诱导的急性胃损伤,其可能作用机制为抗氧化、抗炎和抗凋亡。富氢水安全可靠,未发现对机体存在毒副作用。