【摘 要】
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目的:在大肠杆菌中克隆和表达人源Thymosin β 4(TB4)基因并进行分离纯化和促血管生成生物活性鉴定.
方法:人工设计TB4基因,其密码子为大肠杆菌所偏爱,将合成的寡核苷酸
【机 构】
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南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏南京,210093
【出 处】
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2006世界华人医药生物技术研讨会
论文部分内容阅读
目的:在大肠杆菌中克隆和表达人源Thymosin β 4(TB4)基因并进行分离纯化和促血管生成生物活性鉴定.
方法:人工设计TB4基因,其密码子为大肠杆菌所偏爱,将合成的寡核苷酸片段经分子克隆拼接成TB4基因片段,与pET28a(+)载体连接成重组表达质粒pET28a-TB4,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达带His6-Tag的融合蛋白His6-TB4,通过镍柱亲和层析纯化,通过SDS-PAGE分析鉴定,由CAM试验进行重组蛋白活性的生物活性鉴定.
结果:经DNA序列分析鉴定,重组质粒pET28a-TB4构建成功,IPTG诱导后的融合蛋白His6-TB4在大肠杆菌中得到高效表达,并经一步镍柱亲和层析,即获得纯化.CAM试验证明其有促进毛细血管生成的活性.
结论:获得高效表达的、高纯度的His6-TB4融合蛋白,为Thymosin β4的进一步的功能分析和促血管生成生物活性研究奠定了基础.
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