【摘 要】
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利用寡核苷酸介导的定点突变方法，将重组人尿激酶原(cecombinant single chain urokinase-type plasminogen activator,rscu-PA)中151位赖氨酸(Lysl51)突变为谷氨酸(Glu151)，15
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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利用寡核苷酸介导的定点突变方法，将重组人尿激酶原(cecombinant single chain urokinase-type plasminogen activator,rscu-PA)中151位赖氨酸(Lysl51)突变为谷氨酸(Glu151)，154位精氨酸(Arg154)突变为谷氨酸(Glu154),得到尿激酶原变体基因(mscu-PA).尿激酶原变体和未突变的重组尿激酶原均在E.coli中获得表达，超声后所得包涵体经体外变复性并得到纯化.结果表明，尿激酶原变体对纤溶酶(plasmin)的敏感性比未突变的重组尿激酶原低约40％，转变纤溶酶原(Glu-plasminogen)为纤溶酶的活性基本相同.两种产物经纤溶酶活化后，分别得到了双链尿激酶(rtcu-PA)和双链尿激酶变体(mtcu-PA).它们对人工合成的发色底物S2444反应的动力学基本一致，对Glu-plasminogen的催化反应的米氏动力学常数Km基本一致，但mtcu-PA的Kcat仅为rtcu-PA的80％.酪蛋白降解系统(caseinolytic system)实验表明，在纤维蛋白和纤溶酶原存在的情况下，尿激酶原变体较未突变尿激酶原能加快酪蛋白的降解，说明mtcu-PA对纤维蛋白有一定的亲和性.
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