猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡ基因无药物抗性标记突变株HBC^-／GFP^＋的构建及其生物学特性研究

来源 :生物工程学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：fishonscreen

【摘要】

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通过使用枯草芽胞杆菌一个蔗糖敏感sacB基因发展了一种依靠蔗糖的负向筛选系统，这种方法允许没有标记突变的基因进入胸膜肺炎放线杆菌染色体。首先，构建了猪传染性胸膜肺炎放线

【作者】

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贝为成何启盖方六荣肖少波刘丽娜洪文洲刘正飞陈焕

【机构】

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华中农业大学动物医学院动物病毒室

【出处】

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生物工程学报

【发表日期】

：

2004年5期

【关键词】

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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素 apxⅡ基因负向选择突变株疫苗 Actinobacillus pleuropneumoniae toxin apxII

【基金项目】

：

国家自然科学基金 (No.3 0 2 0 0 0 11),,湖北省科技攻关项目 (No .2 0 0 1AA2 0 1B0 2 )基金资助~~

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通过使用枯草芽胞杆菌一个蔗糖敏感sacB基因发展了一种依靠蔗糖的负向筛选系统，这种方法允许没有标记突变的基因进入胸膜肺炎放线杆菌染色体。首先，构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡ基因GFP插入失活型的重组质粒pOSAKCG，其中一个表达盒含有氨苄青霉素基因和以外膜蛋白omlA作为启动子表达sacB基因。重组质粒pOSAKCG通过电穿孔转化，它的突变apxⅡCA基因与野生型亲本菌株胸膜肺炎放线杆菌HB03染色体上野生型apxⅡCA基因发生同源交换，两步法筛选获得了apxⅡ基因突变株HBC^-／GFP^

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