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目的 建立改良分子信标一双重实时荧光PCR同时检测金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7,应用于细菌性食物中毒的快速诊断.方法 根据GeneBank公布的金黄色葡萄球菌nuc基因序列和大肠杆菌O157:H7rfbE基因序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标一双重实时PCR检测体系.结果 双重荧光PCR反应体系检测151株金黄色葡萄球菌和27株大肠杆菌O157:H7,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰.对8762份大便、食品等标本进行检测,315份标本金黄色葡萄球菌实时荧光PCR阳性.其中286份金黄色葡萄球菌培养阳性;31份标本大肠杆菌O157:H7实时荧光PCR阳性.其中26份大肠杆菌O157:H7培养阳性.从样品处理到检测结果仅需要时间2h～1d.结论 改良分子信标一多重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157:H7食物中毒的快速诊断和肠道传染病的初筛,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.