【摘 要】
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该实验用双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与头孢呋辛(cefuroxime,CFX)或氨苄青霉素联用,探讨其对大肠杆菌的协同抗菌作用及其机制.采用微量肉汤稀释法和2,3,5-氯化三苯基
【机 构】
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中国中医科学院中药研究所,北京100700贵州医科大学基础医学院,贵州贵阳550000;贵州医科大学基础医学院,贵州贵阳550000;中国中医科学院中药研究所,北京100700;
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该实验用双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)与头孢呋辛(cefuroxime,CFX)或氨苄青霉素联用,探讨其对大肠杆菌的协同抗菌作用及其机制.采用微量肉汤稀释法和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride,TTC)法确定出DHA、CFX和氨苄青霉素的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)分别为300,25,25 μmol·L-1,头孢呋辛的最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)为25 μmol· L-1,DHA的MBC＞600μmol· L-1;采用棋盘稀释确定出DHA与头孢呋辛或与氨苄青霉素联合的分级抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)分别为0.375和0.75,表现为协同作用或加和作用.从时效曲线可以得出两药联用后对大肠杆菌的作用明显强于DHA和CFX各自单用的,说明DHA联用后,可以减少CFX的使用量.继而研究了DHA与头孢呋辛协同抗菌的机制:聚丙烯凝胶电泳结果显示,两药联用的条带比各自单用的更浅,有的谱带甚至消失,说明两药联用后对总蛋白谱带具有明显的抑制作用;电导率法结果显示,两药联用后菌液的电导率值明显增高;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)检测显示,联用组碱性磷酸酶渗漏最为明显,提示菌体完整性可能受到破坏;扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)结果显示,两药联用后对大肠杆菌形态的破坏作用比单独用药组强;荧光定量PCR结果显示,两药联用能抑制大肠杆菌超氧压力反应相关基因(soxS)的表达.结果 证明双氢青蒿素与头孢呋辛联用具有协同作用.
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