【摘 要】
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目的 观察左归丸对衰老骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖能力、分化潜能、干性基因及衰老相关分子表达的影响，以进一步阐明左归丸延缓衰老的分子机制。方法 原代培养大鼠BMSCs,采用免疫荧光染色及流式细胞术鉴定细胞表面标记物，D-半乳糖（D-gal）诱导建立衰老BMSCs模型；取P3代BMSCs,随机分为空白对照组，D-gal衰老模型组和D-gal+左归丸组，根据衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-g
【基金项目】
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国家自然科学基金（81803987;82174102）；
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目的 观察左归丸对衰老骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖能力、分化潜能、干性基因及衰老相关分子表达的影响，以进一步阐明左归丸延缓衰老的分子机制。方法 原代培养大鼠BMSCs,采用免疫荧光染色及流式细胞术鉴定细胞表面标记物，D-半乳糖（D-gal）诱导建立衰老BMSCs模型；取P3代BMSCs,随机分为空白对照组，D-gal衰老模型组和D-gal+左归丸组，根据衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色及MTT检测结果确定D-gal造模浓度、左归丸安全剂量及作用时间：除空白对照组采用常规BMSCs培养方法外，其余两组给予10g/L D-gal的完全培养基诱导以建立衰老细胞模型，D-gal+左归丸组在造模同时给予0.6g/L左归丸药液进行干预，作用时间为48h; MTT法测定各组细胞增殖能力，多系诱导分化试剂盒检测各组细胞成骨、成软骨及成脂分化能力，Western blot法检测各组细胞干性基因（Oct-4/Nanog/Sox-2）及衰老相关分子（p16/p21/p53）表达水平。结果 与空白对照组比较，D-gal衰老模型组SA-β-gal染色阳性细胞数显著增加（P＜0.001）,细胞增殖能力明显下降（第6天P＜0.01,第7天P＜0.001）,BMSCs的成骨、成软骨及成脂分化能力均有所降低，干性基因Oct-4、Nanog及Sox-2蛋白表达显著降低（P＜0.001）,而衰老相关分子p16、p21和p53蛋白表达则明显增加（P＜0.01,P＜0.05,P＜0.001）;与D-gal衰老模型组比较，左归丸可以明显减少SA-β-gal阳性细胞数（P＜0.001）,显著提高衰老BMSCs的增殖能力（第6天P＜0.05,第7天P＜0.01）,改善其成骨、成软骨及成脂分化潜能，且左归丸能明显降低p16、p53蛋白表达（P＜0.01）,显著提高Oct-4、Sox-2蛋白表达（P＜0.01,P＜0.001）,同时可以减少p21蛋白表达、增加Nanog蛋白表达，但结果无明显统计学差异。结论 左归丸可以减少衰老BMSCs数量，提高衰老BMSCs的增殖能力，改善其功能从而延缓BMSCs衰老，其机理可能与左归丸提高衰老BMSCs干性基因表达、降低衰老相关分子表达有关。
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