研究下调激活转录因子3(ATF3)的表达对肾上腺皮质腺癌细胞增殖的影响及其作用机制。
方法利用免疫组化和Western印迹分别检测ATF3在人肾上腺皮质肿瘤组织和细胞中的表达；运用脂质体2000转染法将siATF3转染肾上腺皮质腺癌细胞Sw-13和NCI-H259R细胞，运用逆转录PCR检测ATF3 mRNA表达；Western印迹法检测ATF3、cleaved caspase 3、caspase 3、cleaved PARP、PARP蛋白表达；四甲基偶氮唑盐(MTT)和异硫氰酸胍标记磷脂结蛋白(AnnexinV-FITC)/碘化丙啶(PI)分别测定细胞增殖率和细胞凋亡率；NCI-H259R细胞分别经NVP-BEZ235、Perifosine、BKM120、IWP-2、PP2、KN93、Everolimus作用后，运用实时荧光定量PCR(realtime PCR)测定ATF3 mRNA的表达；MTT比色法检测ATF3对抑制相关信号通路后细胞增殖的影响。
结果ATF3在人肾上腺皮质腺肿瘤组织和细胞中呈高表达；而转染siATF3的Sw-13和NCI-F259R细胞ATF3 mRNA和蛋白表达显著降低；与阴性对照组(NC siRNA)比较，siATF3转染显著抑制Sw-13和NCI-F259R细胞增殖(P<0.05)，细胞凋亡率显著增加(P<0.05)；Western印迹结果显示siATF3转染的细胞cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白水平显著增加；realtime PCR结果显示，与二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组相比，PP2、KN93、IWP-2信号通路抑制剂均显著抑制ATF3 mRNA的表达(P<0.05)，而ATF3能够显著促进PP2、KN93、IWP-2信号抑制剂作用NCI-F259R细胞后的增殖活性。
结论ATF3在肾上腺皮质腺癌组织和细胞中高表达，下调ATF3的表达能抑制Sw-13和NCI-H259R细胞增殖，激活细胞凋亡通路诱导细胞凋亡；其机制与Wnt/β-catenin通路、CaMKI通路及SRC通路的激活相关。