【摘 要】
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目的 探讨并优化制备基因工程Th17细胞的方法,评估制备的工程Th17细胞是否具有同天然Th17细胞类似的表型和功能.方法 包装含RORγt基因的重组慢病毒pXZ9-RORγt和空载体对
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目的 探讨并优化制备基因工程Th17细胞的方法,评估制备的工程Th17细胞是否具有同天然Th17细胞类似的表型和功能.方法 包装含RORγt基因的重组慢病毒pXZ9-RORγt和空载体对照质粒pXZ9.C57BL6小鼠CD4+ CD25 - na(i)ve T细胞体外活化36 h后依据感染慢病毒颗粒的不同及是否添加TGF-β和IL-6,分为五组:pXZ9-RORγt组、TGF-β+ IL-6组(pXZ9+ TGF-β+ IL-6组)、联合组(pXZ9-RORγt+ TGF-β+ IL-6组)、空载体对照组(pXZ9组)及空白对照组.流式细胞术检测各组IL-17A阳性细胞比例,荧光定量PCR检测各组细胞IL-17A、IL-17F、IL-21和IFN-γ表达水平.通过小鼠实验性变应性脑脊髓炎(EAE)模型评估各组细胞是否具有加重EAE的功能.结果 ①pXZ9-RORγt组、TGF-β +IL-6组和联合组均制备出工程Th17细胞,其中联合组IL-17A阳性率达(60.59±8.15)％,明显高于pXZ9-RORγt组[(40.25±5.46)％]和TGF-β+IL-6组[(14.36±5.27)％].②各组工程Th17细胞均表达IL-17A与IL-17F,而IL-21仅在给予TGF-β和IL-6时明显升高.③各组工程Th17细胞均可加重小鼠EAE.结论 成功建立了制备高效工程Th17细胞的方法,其中过表达RORγt基因与联合TGF-β和IL-6不仅可提高Th17细胞的制备效率,而且制备的工程Th17细胞在表型和功能上与天然Th17细胞相类似.
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