【摘 要】
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目的探讨转录活化蛋白1 (signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)反义寡核苷酸对肺成纤维细胞增殖及分泌羟脯氨酸的影响.方法取Wistar大鼠10只,随机分为博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各5只,分别向气管内灌注BLM和NS后7 d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),并将BLM组的AM分为STAT1
【机 构】
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646000,四川省泸州医学院附属医院呼吸内科,四川大学华西医院呼吸内科,,,,
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目的探讨转录活化蛋白1 (signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)反义寡核苷酸对肺成纤维细胞增殖及分泌羟脯氨酸的影响.
方法取Wistar大鼠10只,随机分为博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组各5只,分别向气管内灌注BLM和NS后7 d处死动物,通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞(AM),并将BLM组的AM分为STAT1反义寡核苷酸(ASON)组、STAT1正义寡核苷酸(SON)组、地塞米松(DEX)组和空白对照组,分别加入ASON、SON、DEX(空白对照组只加培养基)后培养36 h,收集培养的条件上清液和细胞;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测AM的STAT1、细胞间黏附分子1 (intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)mRNA和蛋白表达水平;将条件上清液加入肺成纤维细胞中继续培养30 h,用3氢标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TDR)检测肺成纤维细胞的增殖情况,用对二甲氨基苯甲醛法检测肺成纤维细胞分泌羟脯氨酸情况.
结果(1)经ASON处理后,AM的STAT1 mRNA表达明显降低(31.8±3.5),与空白对照组(65.5±4.6)、SON组(64.2±4.3)、DEX组(44.1±4.6)比较差异有统计学意义(P＜0.05);与SON组和空白对照组比较,DEX处理后的AM的STAT1 mRNA表达也明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);而空白对照组和SON组AM的STAT1 mRNA表达比较差异却无统计学意义(P＞0.05);NS组AM的STAT1 mRNA表达(14.9±3.1)又明显低于空白对照组、ASON组、SON组、DEX组,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)AM的ICAM-1 mRNA表达与STAT1 mRNA表达的变化一致.(3)ASON组(4.4±0.6)、NS组(3.7±0.4)AM的STAT1蛋白表达均明显低于空白对照组(7.6±0.6)、SON组(7.7±0.7)、DEX组(5.9±0.4),P均＜0.05;DEX组的STAT1蛋白表达明显低于空白对照组和SON组(P＜0.05);而空白对照组和SON组的STAT1蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).(4)AM的ICAM-1蛋白表达、肺成纤维细胞分泌羟脯氨酸的能力和增殖情况与AM的STAT1蛋白表达的变化一致.
结论STAT1反义寡核苷酸能抑制AM内STAT1、ICAM-1mRNA和蛋白表达;STAT1反义寡核苷酸处理AM后的培养条件上清液能引起肺成纤维细胞的增殖能力及分泌羟脯氨酸的能力明显下降.
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