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目的 :构建一种带有绿色荧光蛋白 (gfp)、潮霉素磷酸转移酶和HSV -tk的融合基因cDNA(hytk)的新型真核表达载体。方法 :利用脑炎心肌炎病毒 (EMCV)的内部核糖体进入位点 (IRES) ,将gfp的cDNA与hytk基因连接 ,构建获得含gfp和hytk基因的重组质粒 ;lipofectin介导下转染人膀胱癌细胞株EJ,并检测其表达情况。结果 :成功地构建了含gfp和hytk基因双顺反子真核表达载体 ,PCR检测证实转基因细胞的gfp与hytk基因的整合 ,荧光显微镜下可观察到发绿色荧光的转基因细胞 ,MTT法测定示丙氧鸟苷 (GCV)对EJ/hytk -gfp细胞有明显的杀伤作用 ,此杀伤效应呈时间和剂量依赖性 ,72hIC5 0值为 2 16mg/L ,而对野生型的EJ细胞无明显毒性 (P <0 0 5 )。结论 :含绿色荧光蛋白和hytk基因双顺反子真核表达载体的构建为hytk基因治疗恶性肿瘤用于临床提供了新的治疗工具及随访检测手段