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目的
探讨瘦素对小鼠C2C12细胞内GSK-3β活性的作用及其作用机制。
方法体外培养C2C12细胞，经3 d分化诱导成肌管细胞，对已分化的C2C12细胞，瘦素（100 nmol/L）分别处理0、5、15及30 min，利用Western印迹法检测GSK-3β的表达及Ser-9磷酸化水平；免疫共沉淀方法（CO-IP）观察在有无瘦素作用的情况下，APPL1-瘦素受体-GSK-3β之间的相互作用关系；在APPL1基因沉默的C2C12细胞内，观察此情况下GSK-3β的表达及Ser-9磷酸化水平；在过表达GSK-3β或抑制其活性的情况下，观察APPL1的表达及Ser-401磷酸化水平。
结果（1）瘦素呈时间依赖性刺激C2C12细胞GSK-3βSer-9磷酸化水平升高，其中瘦素处理30 min组较对照组高4.08倍（P<0.01）；（2）在C2C12细胞内APPL1与瘦素受体及GSK-3β共结合，且在瘦素作用下APPL1-GSK-3β结合能力更强；（3）在APPL1表达沉默时，GSK-3βSer-9磷酸化水平与对照组相比显著低；（4）GSK-3β可刺激C2C12细胞APPL1 Ser-401位点磷酸化。
结论瘦素通过刺激C2C12细胞GSK-3βSer-9磷酸化的途径促进肌糖原合成，其作用是通过APPL1直接与瘦素受体及GSK-3β结合来介导的， GSK-3β反过来可刺激APPL1 Ser-401位点磷酸化。