【摘 要】
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为了探究不同提取方法对葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取效果的影响,首先以大葱叶片为实验材料,采用高盐低p H值法和蔗糖DNase法,对其进行叶绿体DNA提取测试。结果表明,高盐低pH法
【机 构】
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吉林农业大学园艺学院; 山东省农业科学院蔬菜花卉研究所山东省设施蔬菜生物学重点实验室国家蔬菜改良中心山东分中心; 山东农业大学园艺科学与工程学院;
【基金项目】
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山东省农业科学院青年英才培养计划(IVFSAAS2016-2018-01);国家自然科学基金(31672165; 31201635;31301786)共同资助
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为了探究不同提取方法对葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取效果的影响,首先以大葱叶片为实验材料,采用高盐低p H值法和蔗糖DNase法,对其进行叶绿体DNA提取测试。结果表明,高盐低pH法优于蔗糖DNase法,其DNA纯度相似,A260/A280值分别1.984和1.977;产率差异大,分别为0.482μg/g FW (fresh weight, FW)和0.059μg/g FW,高盐低pH值法是蔗糖DNase法产率的8.17倍。随后,利用叶绿体MatK、线粒体Atp6和核LFY基因设计引物,根据各组引物自身的扩增效率,以试剂盒提取的总DNA为对照,分别对三种细胞器DNA拷贝数的比值进行评估研究,高盐低pH法提取叶绿体DNA含量是试剂盒法的78.38倍,而蔗糖DNase法为15.51倍,高盐低pH法是蔗糖DNase法的5.05倍。高盐低pH法提取的叶绿体DNA产率和含量均优于蔗糖DNase法,同时在此基础建立了细胞器DNA含量定量分析方法。随后我们用高盐低pH法对葱属蔬菜作物的洋葱、大蒜和韭菜进行了测试,获得了预期的效果。该研究为今后葱属作物高效、高纯度、无污染的叶绿体DNA提取和葱属蔬菜作物细胞器全基因组测序提供依据。
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