【摘 要】
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目的 通过体外培养骨关节炎(OA)软骨细胞体系,了解肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β对蛋白聚糖代谢的调节作用.方法 软骨细胞来自OA患者进行膝关节置换术的股骨髁,
【机 构】
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卫生部中日友好医院风湿免疫科,中国医学科学院,澳大利亚珀斯皇家医院骨与肌病代谢研究中心
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目的 通过体外培养骨关节炎(OA)软骨细胞体系,了解肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β对蛋白聚糖代谢的调节作用.方法 软骨细胞来自OA患者进行膝关节置换术的股骨髁,实验采用第1代软骨细胞.随机将细胞分为4组:对照组、TNF-α组、IL-β组和联合组(TNF-α+IL-1β),在培养液中加入不同的刺激因子共培养4 d.采用3种方法了解蛋白聚糖的代谢水平:①用二甲基亚甲蓝分光光度法(DMMB法)检测细胞中及培养液中的糖胺多糖(GAG)含量;②酶联免疫吸附法通过2种抗蛋白聚糖单克隆抗体(Mab-383和5D4)检测培养液中蛋白聚糖的不同代谢片段;③反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法检测软骨细胞的蛋白聚糖、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)和ADAMTS-5的Mrna水平.结果 ①实验组培养液中(GAG含量均明显高于对照组(p＜0.01);②TNF-α组、IL-1β组及联合组的培养液中5D4片段的水平均高于对照组(P＜0.01),而各组383片段水平差异无统计学意义;③实验组的蛋白聚糖Mrna水平均低于对照组(P＜0.01),TNF-α组的ADAMTS-5、IL-β组的ADAMTS-4及联合组的两种酶的Mrna水平均显著高于对照组(P＜0.01).结论 TNF-α及IL-1β可下调人OA软骨细胞的蛋白聚糖Mrna表达,上调ADAMTS-4及ADAMTS-5的mRNA表达.并促进蛋白聚糖的分解,可能在OA的发病中起着一定的作用.
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