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摘要：兔出血症病毒（RHDV）可引起兔病毒性出血症（RHD）。RHD是一种急烈性、高度致死性兔传染病，给家兔养殖业造成巨大经济损失。2010年，研究人员在法国兔场发现一种新型兔出血症病毒RHDV2。与经典RHDV不同，该毒株能够感染幼龄家兔，甚至跨物种感染野兔，并突破经典RHDV疫苗的免疫防线，迅速在世界范围内流行。目前我国还未有RHDV2的报道，但随时面临发生该疫情的风险。本文综述RHDV2的病原学、流行病学特征、临床症状、诊断和防控等方面的研究进展，旨在提高对RHDV2的认识，加强对RHDV2的监测，提前做好防控措施。
关键词：兔出血症病毒；新毒株；跨物种；风险；防控
中图分类号： S852.65 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2016）09-0001-03
兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）感染家兔可引起兔病毒性出血症（rabbit hemorrhagic disease，RHD），俗称兔瘟，该病传染性强、死亡率高，是一种以急性肝坏死为主要特征的烈性传染病，严重危害我国养兔业。 RHDV一般感染成年家兔，属于杯状病毒科兔病毒属，该属的成员还有欧洲野兔综合症病毒（European brown hare syndrome virus，EBHSV）和非致病性兔类病毒（non-pathogenic lagovirus，NP-LV）[1]。NP-LV包含非致病性的兔杯状病毒（rabbit calicivirus，RCV）[2]和一些类似RCV或在系统发育上与RCV接近的兔杯状病毒，如MRCV株[3]。1984年，该病最先在中国公开报道[4]，其后，1986年在欧洲意大利暴发[5-6]，并以此为源头传遍整个欧洲并波及全球。
从首次报道RHDV到现在的30年里，RHDV持续发生遗传变异。1998年Capucci等报道了RHDV发生抗原变异，并将变异株命名为RHDVa[7]，次年，德国也报道了该变异株[8]。研究者们根据系统发育关系，将RHDV毒株分为不同的基因组（分别命名为G1～G6，G6也称RHDVa）[9]。然而2010年，le Gall-Recule等在法国兔场发现了1株兔出血症病毒新毒株，命名为RHDVb或RHDV2。该变异毒株RHDV2与经典的G1～G6型在遗传特性上有很大的差异，免疫经典毒株RHDV不能产生很好的交叉免疫保护作用，导致RHDV2在家兔和野兔中跨物种传播[5]。在接下来的几年里，该毒株蔓延到意大利[6]、西班牙[10]、葡萄牙[11]、英格兰和威尔士[12]、苏格兰[13]、德国[14]，并于2014年年底和2015年年初在欧洲大陆以外的亚速尔群岛被检测到[14]，RHDV2取代经典RHDV的趋势正在扩大。2015年，Hall等报道在澳大利亚首都直辖区也检测到RHDV2，该毒株与葡萄牙和亚速尔群岛报道的变异毒株类似[15]。2016年，Martin-Alonso等指出RHDV2很有可能会从加那利群岛传播至非洲北部[16]。由此可见，RHDV2的流行趋势正在世界范围内逐步扩大。虽然迄今为止在中国还未有检测到该毒株的报道，但是随时面临发生该疫情的风险。因此，我们应该加强对变异毒株RHDV2的认识，把握国内流行情况，提前做好防范措施。
1 病原特性
RHDV2是单股正链RNA病毒，无囊膜，呈正二十面体对称结构，直径为32～44 nm。RHDV2的全序列已提交至GenBank，并命名为RHDV-N11，基因全长7 447 bp，5′非编码区9 nt，3′非编码区69 nt长于经典RHDV。RHDV2基因组包含2个开放阅读框（ORF1和ORF2）。ORF1（10～7 044 bp）的翻译产物经过加工切割后至少形成8个成熟的蛋白质分子，分别是非结构蛋白NSP1（2A）、NSP2（2B）、NSP3（2C核苷酸水解酶）、NSP4（3A）、NSP5（3B VPg）、NSP6（3C 蛋白酶）、NSP7（3D RNA复制酶）和衣壳蛋白VP1[17]。
RHDV2和RHDV同属于杯状病毒科兔病毒属成员，RHDV2与高致病性RHDV一样，可引起家兔病毒性出血症。两者的基因同源性虽然高达82.4%[5]，但是系统发生树分析结果表明RHDV2与引起相同症状的RHDV亲缘关系较远，而与非致病性的RCV亲缘关系更近[6]。因此研究者推测，RHDV2很可能是从非致病的兔病毒属成员演变而来的。另外，毒力差异分析表明RHDV2对野兔的感染率和致死率明显低于家兔[18]，这可能是因为家兔是RHDV2的天然宿主。
2 流行病学特征
易感动物：与经典RHDV只感染成年家兔不同，RHDV2感染宿主范围更广，不但能够感染成年家兔，还能感染幼龄家兔以及欧洲野兔（Cape Hares 品种）[5]。RHDV2对各物种的感染敏感性不同，其中最易感的还是家兔，所以家兔应该是RHDV2的天然宿主。
传染源：感染RHDV2的兔是主要的传染源，包括感染病死和带毒未死的兔。
传播途径：杯状病毒可通过受污染的水和食物经粪-口传播，病毒可以结合呼吸道和消化道上皮细胞HBGA受体进入宿主身体。例如近来研究较透彻的杯状病毒科人诺如病毒就是通过与HBGA结合之后进入宿主体内[19]。已有研究证明RHDV2可与HBGA的口袋位置P2区结合，这与诺如病毒GⅡ型结合HBGA的方式相似，然而RHDV结合的是HBGA的P1区[20]。这种不同的结合方式可能导致它们的易感宿主不完全相同。经典RHDV可直接通过接触感染动物分泌物、排泄物，或间接通过污染的水、食物、饲养设备等造成感染[21]。目前关于新毒株RHDV2传播途径的报道很少，但可以肯定的是间接接触在该毒株传播过程中起着重要的作用。
3 临床症状 与经典毒株RHDV相同，RHDV2引起的兔病毒性出血症以实质器官出血、瘀血为主要特征。然而，RHDV2和RHDV引起的疾病症状在持续时间、死亡率和亚急性或慢性感染等方面都存在差异，其中亚急性和慢性感染较多地出现在RHDV2感染过程中[5]。在疾病病理方面，RHDV引起的病变已被详细描述[22-23]，然而关于RHDV2感染后病变发展特点的研究资料仍然有限。尸检RHDV2感染致死的兔发现在心脏、气管、胸腺、肺、肝脏、肾脏和肠道等多处有出血现象（图1-A）并伴有黄疸[10]。RHDV2感染的病理特征为胸腔和腹腔有丰富的血液样渗出物，肝脏灰白肿大（图1-B）[24]，肺脏出血，气管充、出血，小肠肠道绒毛有局灶性坏死[10]。
4 诊断
RHDV的检测方法主要包括临床检查和实验室检查[26]。一般先通过流行病学、临床症状、剖检病变等临床检查对发病症状进行观察，然后通过利用血凝、血凝抑制试验，ELISA 试验以及分子生物学等试验方法进行实验室检查来最终确诊。
4.1 临床观察
尸检病死兔，观察有无兔出血症的经典症状：气管弥漫性出血，鼻腔及气管充满血样泡沫，肺肿大出血，肾瘀血并有出血点，心脏瘀血、心包膜有点状出血，肝灰白肿大出血、脾脏肿大等。虽然RHDV与RHDV2感染的临床特征可能不同，但病理特性很类似[5]，这给两者的区分带来一定困难，因此通过对发病症状的临床观察，仅能对疾病作出初步诊断，最终还是需要实验人员通过实验室分子生物学等技术手段来进行确诊。
4.2 实验室诊断
近年来，随着免疫学与分子生物学技术日臻完善，兔病毒性出血症的诊断方法有了长足的发展，可通过血清学和分子生物学等方法很好地进行实验室诊断。目前，较多采用快速且重复性好的间接ELISA法检测RHDV，然而利用RHDV2的衣壳蛋白为包被抗原建立的ELISA检测方法不能区分RHDV和RHDV2的感染，此方法还需要改进[27]。近来研究人员已通过建立特异性探针实时定量PCR快速检测RHDV2，该方法可用于鉴别诊断RHDV2，监测病毒载量和疾病进程，评价疫苗效果[27]。目前笔者所在实验室依据RHDV2衣壳蛋白的变异区已建立区分RHDV2与RHDV的RT-PCR法。尽管如此，目前针对RHDV2建立的检测方法还很单一，仍需要研究者进一步建立快速、有效、便捷的诊断方法。
5 防控
疫苗接种是防控该病的有效措施，然而经典RHDV疫苗对RHDV2不能产生很好的交叉免疫保护，所以需要研发有效的疫苗来预防RHDV2引起的新型兔瘟的发生。近来，西班牙的Montbrau等研究报道了变异毒株RHDV2的灭活苗ERAVAC，并通过攻毒保护试验证明该疫苗安全有效[28]。另外，对该病的预防须考虑切断传播途径，尤其是要注意RHDV2感染范围广，饲养过程中需避免与带毒兔接触。与此同时，科研人员应加快RHDV2疫苗的研发。如果暴发新型兔瘟，应采取紧急预防措施，如免疫灭活苗来控制疫情，防止该病的传播。
6 结语
RHDV2自2010年首次在法国被报道以来，迅速从欧洲大陆传播开来，逐步在世界范围内流行。RHDV2不仅传播速度快、潜伏期长，而且感染宿主的范围较经典毒株更广，因此该毒株一旦流行，将对养兔业产生十分严重的危害甚至会造成毁灭性的打击。虽然我国目前还未见RHDV2的报道，但对该新毒株的关注不容忽视。当下我们应该建立快速、特异、灵敏的RHDV2诊断方法，全面掌握国内RHDV毒株的流行情况。一旦发现RHDV2在中国流行，相关部门应迅速采取措施，紧急防控，控制传染源，切断传播途径，避免传播范围的扩大，减少兔场的经济损失，保障养兔业健康发展。
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关键词：兔出血症病毒；新毒株；跨物种；风险；防控
中图分类号： S852.65 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2016）09-0001-03
兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV）感染家兔可引起兔病毒性出血症（rabbit hemorrhagic disease，RHD），俗称兔瘟，该病传染性强、死亡率高，是一种以急性肝坏死为主要特征的烈性传染病，严重危害我国养兔业。 RHDV一般感染成年家兔，属于杯状病毒科兔病毒属，该属的成员还有欧洲野兔综合症病毒（European brown hare syndrome virus，EBHSV）和非致病性兔类病毒（non-pathogenic lagovirus，NP-LV）[1]。NP-LV包含非致病性的兔杯状病毒（rabbit calicivirus，RCV）[2]和一些类似RCV或在系统发育上与RCV接近的兔杯状病毒，如MRCV株[3]。1984年，该病最先在中国公开报道[4]，其后，1986年在欧洲意大利暴发[5-6]，并以此为源头传遍整个欧洲并波及全球。
从首次报道RHDV到现在的30年里，RHDV持续发生遗传变异。1998年Capucci等报道了RHDV发生抗原变异，并将变异株命名为RHDVa[7]，次年，德国也报道了该变异株[8]。研究者们根据系统发育关系，将RHDV毒株分为不同的基因组（分别命名为G1～G6，G6也称RHDVa）[9]。然而2010年，le Gall-Recule等在法国兔场发现了1株兔出血症病毒新毒株，命名为RHDVb或RHDV2。该变异毒株RHDV2与经典的G1～G6型在遗传特性上有很大的差异，免疫经典毒株RHDV不能产生很好的交叉免疫保护作用，导致RHDV2在家兔和野兔中跨物种传播[5]。在接下来的几年里，该毒株蔓延到意大利[6]、西班牙[10]、葡萄牙[11]、英格兰和威尔士[12]、苏格兰[13]、德国[14]，并于2014年年底和2015年年初在欧洲大陆以外的亚速尔群岛被检测到[14]，RHDV2取代经典RHDV的趋势正在扩大。2015年，Hall等报道在澳大利亚首都直辖区也检测到RHDV2，该毒株与葡萄牙和亚速尔群岛报道的变异毒株类似[15]。2016年，Martin-Alonso等指出RHDV2很有可能会从加那利群岛传播至非洲北部[16]。由此可见，RHDV2的流行趋势正在世界范围内逐步扩大。虽然迄今为止在中国还未有检测到该毒株的报道，但是随时面临发生该疫情的风险。因此，我们应该加强对变异毒株RHDV2的认识，把握国内流行情况，提前做好防范措施。
1 病原特性
RHDV2是单股正链RNA病毒，无囊膜，呈正二十面体对称结构，直径为32～44 nm。RHDV2的全序列已提交至GenBank，并命名为RHDV-N11，基因全长7 447 bp，5′非编码区9 nt，3′非编码区69 nt长于经典RHDV。RHDV2基因组包含2个开放阅读框（ORF1和ORF2）。ORF1（10～7 044 bp）的翻译产物经过加工切割后至少形成8个成熟的蛋白质分子，分别是非结构蛋白NSP1（2A）、NSP2（2B）、NSP3（2C核苷酸水解酶）、NSP4（3A）、NSP5（3B VPg）、NSP6（3C 蛋白酶）、NSP7（3D RNA复制酶）和衣壳蛋白VP1[17]。
RHDV2和RHDV同属于杯状病毒科兔病毒属成员，RHDV2与高致病性RHDV一样，可引起家兔病毒性出血症。两者的基因同源性虽然高达82.4%[5]，但是系统发生树分析结果表明RHDV2与引起相同症状的RHDV亲缘关系较远，而与非致病性的RCV亲缘关系更近[6]。因此研究者推测，RHDV2很可能是从非致病的兔病毒属成员演变而来的。另外，毒力差异分析表明RHDV2对野兔的感染率和致死率明显低于家兔[18]，这可能是因为家兔是RHDV2的天然宿主。
2 流行病学特征
易感动物：与经典RHDV只感染成年家兔不同，RHDV2感染宿主范围更广，不但能够感染成年家兔，还能感染幼龄家兔以及欧洲野兔（Cape Hares 品种）[5]。RHDV2对各物种的感染敏感性不同，其中最易感的还是家兔，所以家兔应该是RHDV2的天然宿主。
传染源：感染RHDV2的兔是主要的传染源，包括感染病死和带毒未死的兔。
传播途径：杯状病毒可通过受污染的水和食物经粪-口传播，病毒可以结合呼吸道和消化道上皮细胞HBGA受体进入宿主身体。例如近来研究较透彻的杯状病毒科人诺如病毒就是通过与HBGA结合之后进入宿主体内[19]。已有研究证明RHDV2可与HBGA的口袋位置P2区结合，这与诺如病毒GⅡ型结合HBGA的方式相似，然而RHDV结合的是HBGA的P1区[20]。这种不同的结合方式可能导致它们的易感宿主不完全相同。经典RHDV可直接通过接触感染动物分泌物、排泄物，或间接通过污染的水、食物、饲养设备等造成感染[21]。目前关于新毒株RHDV2传播途径的报道很少，但可以肯定的是间接接触在该毒株传播过程中起着重要的作用。
3 临床症状 与经典毒株RHDV相同，RHDV2引起的兔病毒性出血症以实质器官出血、瘀血为主要特征。然而，RHDV2和RHDV引起的疾病症状在持续时间、死亡率和亚急性或慢性感染等方面都存在差异，其中亚急性和慢性感染较多地出现在RHDV2感染过程中[5]。在疾病病理方面，RHDV引起的病变已被详细描述[22-23]，然而关于RHDV2感染后病变发展特点的研究资料仍然有限。尸检RHDV2感染致死的兔发现在心脏、气管、胸腺、肺、肝脏、肾脏和肠道等多处有出血现象（图1-A）并伴有黄疸[10]。RHDV2感染的病理特征为胸腔和腹腔有丰富的血液样渗出物，肝脏灰白肿大（图1-B）[24]，肺脏出血，气管充、出血，小肠肠道绒毛有局灶性坏死[10]。
4 诊断
RHDV的检测方法主要包括临床检查和实验室检查[26]。一般先通过流行病学、临床症状、剖检病变等临床检查对发病症状进行观察，然后通过利用血凝、血凝抑制试验，ELISA 试验以及分子生物学等试验方法进行实验室检查来最终确诊。
4.1 临床观察
尸检病死兔，观察有无兔出血症的经典症状：气管弥漫性出血，鼻腔及气管充满血样泡沫，肺肿大出血，肾瘀血并有出血点，心脏瘀血、心包膜有点状出血，肝灰白肿大出血、脾脏肿大等。虽然RHDV与RHDV2感染的临床特征可能不同，但病理特性很类似[5]，这给两者的区分带来一定困难，因此通过对发病症状的临床观察，仅能对疾病作出初步诊断，最终还是需要实验人员通过实验室分子生物学等技术手段来进行确诊。
4.2 实验室诊断
近年来，随着免疫学与分子生物学技术日臻完善，兔病毒性出血症的诊断方法有了长足的发展，可通过血清学和分子生物学等方法很好地进行实验室诊断。目前，较多采用快速且重复性好的间接ELISA法检测RHDV，然而利用RHDV2的衣壳蛋白为包被抗原建立的ELISA检测方法不能区分RHDV和RHDV2的感染，此方法还需要改进[27]。近来研究人员已通过建立特异性探针实时定量PCR快速检测RHDV2，该方法可用于鉴别诊断RHDV2，监测病毒载量和疾病进程，评价疫苗效果[27]。目前笔者所在实验室依据RHDV2衣壳蛋白的变异区已建立区分RHDV2与RHDV的RT-PCR法。尽管如此，目前针对RHDV2建立的检测方法还很单一，仍需要研究者进一步建立快速、有效、便捷的诊断方法。
5 防控
疫苗接种是防控该病的有效措施，然而经典RHDV疫苗对RHDV2不能产生很好的交叉免疫保护，所以需要研发有效的疫苗来预防RHDV2引起的新型兔瘟的发生。近来，西班牙的Montbrau等研究报道了变异毒株RHDV2的灭活苗ERAVAC，并通过攻毒保护试验证明该疫苗安全有效[28]。另外，对该病的预防须考虑切断传播途径，尤其是要注意RHDV2感染范围广，饲养过程中需避免与带毒兔接触。与此同时，科研人员应加快RHDV2疫苗的研发。如果暴发新型兔瘟，应采取紧急预防措施，如免疫灭活苗来控制疫情，防止该病的传播。
6 结语
RHDV2自2010年首次在法国被报道以来，迅速从欧洲大陆传播开来，逐步在世界范围内流行。RHDV2不仅传播速度快、潜伏期长，而且感染宿主的范围较经典毒株更广，因此该毒株一旦流行，将对养兔业产生十分严重的危害甚至会造成毁灭性的打击。虽然我国目前还未见RHDV2的报道，但对该新毒株的关注不容忽视。当下我们应该建立快速、特异、灵敏的RHDV2诊断方法，全面掌握国内RHDV毒株的流行情况。一旦发现RHDV2在中国流行，相关部门应迅速采取措施，紧急防控，控制传染源，切断传播途径，避免传播范围的扩大，减少兔场的经济损失，保障养兔业健康发展。
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