心肌Cav1.2钙通道NT片段的提取纯化及其与CaM的相互作用

来源 :中国医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wuyishijian
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目的 探讨心肌 Cav1.2 钙通道 NT 蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与 CaM 的相互作用。方法 将 NT 的 cDNA 插 入 pGEX-6p-3 质粒载体后,转化大肠杆菌 BL-21 感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D 半乳糖苷(IPTG)诱导 NT 的 GST 融合蛋白表达,GS-4B beads 分离纯化,PreScission 蛋白酶切除 GST 标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS- PAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用 GST pull-down
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