【摘 要】
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目的:观察外源性人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌hbFGF,并探讨其机理;为开展临床创面基因治疗提供实验依据和奠定物质基础.方法:采用
【机 构】
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第四军医大学西京医院整形外科中心烧伤外科,第四军医大学西京医院病理科,第四军医大学基础部生物化学教研室
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目的:观察外源性人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)基因导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌hbFGF,并探讨其机理;为开展临床创面基因治疗提供实验依据和奠定物质基础.方法:采用脂质体包埋hbFGF cDNA的真核表达质粒pcDNA3-hbFGF转染培养的人角朊细胞,经G418筛选、克隆、扩大及传代培养含转基因的角朊细胞.用特异性neo探针原位杂交显示转基因角朊细胞内含有拟转入的pcDNA3-hbFGF质粒载体;抗hbFGF抗体免疫细胞化学法观察转基因角朊细胞内hbFGF的翻译表达;选择人真皮成纤维细胞为效应细胞,应用抗体中和法分析转基因角朊细胞分泌hbFGF活性物质所引起的成纤维细胞增殖效应,了解hbFGF向胞外分泌情况.结果:pcDNA3-hbFGF可经脂质体介导有效地转入靶细胞角朊细胞内;用G418筛选纯化转基因后的角朊细胞内含转入的真核表达质粒pcDNA3-hbFGF,胞浆内有阳性hbFGF表达,并向胞外分泌hbFGF活性物质,刺激真皮成纤维细胞增殖.结论:含外源性hbFGF基因的角朊细胞可于体外纯化及扩大培养,并具有表达分泌hbFGF的功能.
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