【摘 要】
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目的研究凋亡抑制因子α(Livinα)特异的短发夹状RNA(shRNA)在MCF7乳腺癌细胞中对外源Livinα基因表达的抑制作用。方法构建4组EGFP-Livinα融合表达的重组质粒,其中两组分别
【机 构】
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山东协和学院医学院,佳木斯大学基础医学院
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目的研究凋亡抑制因子α(Livinα)特异的短发夹状RNA(shRNA)在MCF7乳腺癌细胞中对外源Livinα基因表达的抑制作用。方法构建4组EGFP-Livinα融合表达的重组质粒,其中两组分别含shRNA1、shRNA2对应的不同序列的c DNA干扰片断,分别电转染入MCF7乳腺癌细胞中,48h后用荧光显微镜观察各实验组细胞中EGFP的表达,流式细胞仪检测转染后各组细胞的平均荧光强度。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中Livinα在RNA水平和蛋白水平的表达。结果酶切及测序证实质粒构建成功;荧光显微镜观察结果显示载体成功转染入MCF7乳腺癌细胞;干扰片段shRNA2可有效抑制目的基因mRNA的表达。结论成功构建的含目的基因有效干扰片断的质粒可抑制目的基因在MCF7乳腺癌细胞中的表达。
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