用单克隆抗体鉴定感染曼氏血吸虫小鼠肝脏内的蛋白抗原

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取CD-1小鼠分别接种曼氏血吸虫尾蚴15~20及80~100条,依次分成轻及重感染两组。由感染9周的小鼠门脉取得成虫,经冷丙酮固定,制成8μm厚的冰冻切片。实验时以针对尾蚴糖蛋白、尾蚴蛋白和雄虫蛋白的单克隆抗体(McAb)以及对照的P3-X63-Ag8腹水液,经硫酸铵沉淀和蛋白A琼脂糖凝胶亲和层析等加以部分纯化,再用四甲基玫瑰红异硫氢酸盐(RIFC)按蛋白:荧光素为2:1的比例结合。抗原抗体均以直接荧光进行检测。肝切片经冷丙酮固定后,PBS洗涤,加用含2mg/ml牛血清白蛋白(BSA)的 CD-1 mice were inoculated with Schistosoma mansoni cercaria larvae 15 to 20 and 80 to 100, divided into mild and severe infection in two groups. Adults were obtained from the mouse portal vein infected for 9 weeks and fixed in cold acetone to make 8-m-thick frozen sections. The experiment was performed with the monoclonal antibody (McAb) against cercaria glycoprotein, cercariae protein and testis protein and the control P3-X63-Ag8 ascites fluid, partially purified by ammonium sulfate precipitation and Protein A Sepharose affinity chromatography , And then tetramethyl Rose Isothiocyanate (RIFC) according to the ratio of protein: fluorescein 2: 1 ratio. Antigen antibodies were detected by direct fluorescence. Liver sections were fixed with cold acetone, washed with PBS, supplemented with 2 mg / ml bovine serum albumin (BSA)
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