探讨糖尿病神经痛大鼠发生认知功能损伤与大鼠海马内源性硫化氢(H2S)的变化间的关系。
方法清洁级健康雄性SD大鼠24只，体重280～320 g，鼠龄4～6周龄，采用随机数字表法分为两组，糖尿病神经痛组(DNP组)和对照组(C组)(n＝12)，DNP组腹腔注射佐脲链菌素(STZ)60 mg/kg，C组大鼠给予腹腔内注射等量柠檬酸钠缓冲液。分别于制备模型当天(T0)和制备模型后7 d(T1)、14 d(T2)、21 d(T3)、28 d(T4)行Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验，以测定其认知功能变化。28 d后行苏木精-伊红(HE)染色观察海马CA1区锥体细胞病理改变；原位末端标记法(TUNEL)检测海马区细胞凋亡情况；液相色谱法测两组海马组织内源性H2S含量；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组大鼠海马胱硫醚-β-合成酶(CBS)蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测两组大鼠海马CBS mRNA表达。两组间比较采用配对t检验。
结果DNP组大鼠的逃避潜伏期在T2[(29.50±5.72) s，t＝2.870，P<0.05]、T3[(37.55±7.08) s，t＝4.771，P<0.01]和T4时[(45.40±10.34) s，t＝5.279，P<0.01]明显延长于T0时[(20.47±5.17) s]；DNP组大鼠在成模后T2[(29.50±5.72) s，t＝3.392，P<0.05]、T3[(37.55±7.08) s，t＝6.175，P<0.01]和T4时的逃避潜伏期[(45.40±10.34) s，t＝6.779，P<0.01]均明显延长于C组大鼠[(19.16±4.79)、(17.13±3.93)、(15.70±2.83) s]。DNP组大鼠T2[(3.17±0.98)次，t＝2.936，P<0.05]、T3[(3.00±0.89)次，t＝3.379，P<0.05)]和T4时穿越平台次数[(2.33±1.03)次，t＝4.294，P<0.01]少于T0时[(4.83±0.98)次]；T3[(19.33±4.55) s，t＝3.122，P<0.05]和T4时象限停留时间[(20.16±5.63) s，t＝2.655，P<0.05]少于T0时[(29.67±6.71) s]；DNP组大鼠T3[(3.00±0.89)次，t＝2.500，P<0.05]和T4时穿越平台次数[(2.33±1.03)次，t＝3.926，P<0.01]明显少于C组[(4.67±1.36)、(4.83±1.17)次]；DNP组大鼠T3[(19.33±4.55) s，t＝3.025，P<0.05]和T4时其所在象限停留时间[(20.16±5.63) s，t＝3.926，P<0.05]少于C组[(30.50±7.81)、(31.67±4.13) s]。与C组比较，DNP组海马细胞排列紊乱，锥体细胞排列松散，海马内出现核固缩现象，部分神经细胞缺失；DNP组海马凋亡阳性细胞[(5.33±1.03)分，t＝9.190，P<0.01]明显多于C组[(1.16±0.41)分]；DNP组大鼠海马H2S含量[(419.9±30.9) ng/g蛋白，t＝2.813，P<0.05]明显少于C组[(461.4±18.6) ng/g蛋白]；DNP组大鼠海马内CBS mRNA(0.67±0.02，t＝15.940，P<0.01)和蛋白水平(0.64±0.06，t＝10.410，P<0.01)明显低于C组(1.00±0.01、1.25±0.01)。
结论糖尿病神经痛大鼠随时间延长逐渐出现认知功能损伤，其严重程度与时间呈正相关。糖尿病神经痛大鼠认知功能损伤与海马神经细胞凋亡及内源性H2S减少密切相关。