【摘 要】
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目的 探讨S100A8/A9-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶信号轴调控非小细胞肺癌进展的分子机制.方法 通过GTEx、CCLE和GEPIA2数据库分析S100A8/A9在肺癌中的表达及临床意义;通过慢病毒转染,建立A549S100A8/A9-和A549S100A8/A9+模型;通过CCK8法、细胞迁移法、Annexin V/PI双染法检测A549S100A8/A9-和A549S100A8/A9+的增值、侵袭、转移和凋亡,分析其细胞功能的改变;应用DNA芯片技术检测A549S100A8/A9-和A549S10
【机 构】
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佛山市第一人民医院呼吸与危重症医学科,广东佛山528000;广东省人民医院呼吸与危重症医学科,广东广州510000
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目的 探讨S100A8/A9-磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶信号轴调控非小细胞肺癌进展的分子机制.方法 通过GTEx、CCLE和GEPIA2数据库分析S100A8/A9在肺癌中的表达及临床意义;通过慢病毒转染,建立A549S100A8/A9-和A549S100A8/A9+模型;通过CCK8法、细胞迁移法、Annexin V/PI双染法检测A549S100A8/A9-和A549S100A8/A9+的增值、侵袭、转移和凋亡,分析其细胞功能的改变;应用DNA芯片技术检测A549S100A8/A9-和A549S100A8/A9+细胞中上调和下调基因,KEGG富集相关通路;根据富集通路结果,通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/AKT)通路蛋白的表达.结果 S100A8/A9在包括肺癌的多种肿瘤组织中异常高表达,而且低表达S100A8/A9的肺癌患者生存期更长.筛选得到A549S100A8/A9-模型.与A549S100A8/A9+相比,A549S100A8/A9的细胞活力在24 h(0.735±0.182和1.414±0.128)、48 h(1.209±0.156和2.436±0.264)、72 h(1.645±0.162和3.153±0.273)均受到抑制、侵袭(545.33±18.145和994.33±43.03)和迁移(980.43±96.52和1653.45±136.27)能力降低,且早期凋亡比例增加(18.567±2.680和6.417±1.166,P<0.05差异具有统计学意义).由DNA芯片结果可知,在A549S100A8/A9-细胞有2513个基因表达下调,1836个基因表达上调,KEGG通路富集结果提示细胞凋亡和PI3K/AKT相关通路均发生明显差异.Western blot结果显示,A549S100A8/A9-细胞的PI3K、Bcl-2、MMP-9、P-AKT、Bcl-2蛋白水平降低,Caspase-3、Bad蛋白表达增多.结论 S100A8/A9可通过调节PI3K/AKT信号通路来促进A549细胞的增殖,侵袭和迁移.
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