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目的
建立以T细胞受体β链(TCRβ)基因重排为分子标志定量检测儿童急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)微小残留病(MRD)的实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测体系。
方法应用BIOMED-2欧洲协作组设计的PCR检测体系，检测26例初发T-ALL患儿的TCRβ基因重排，并进行序列分析与比对。对其中6例患儿根据基因重排后连接区序列设计等位基因特异性寡核苷酸(ASO)引物，结合胚系TaqMan探针与引物，建立RQ-PCR检测方法，行缓解期标本MRD定量追踪检测。
结果92.3%的T-ALL患儿可检测到克隆性TCRβ基因重排[84.6%具有Vβ-(Dβ)-Jβ完全重排，50%具有Dβ-Jβ不完全重排]。通过序列分析，V片段使用频率最高的家族为BV5、BV6，J区使用频率最高的家族为Jβ2.7, J1.3、 J2.4、 J2.6未被使用。6例患儿ASO标准曲线的斜率为-3.54~-3.37，截距为19.35~20.51，相关系数>0.98。定量范围均达到10-4。对随访期标本MRD检测发现，复发患儿的MRD水平在复发前显著升高。
结论以TCRβ基因重排为分子标志对T-ALL患儿行MRD定量检测，具有较高的敏感度和特异性，动态追踪检测随访期标本MRD水平具有重要的临床价值。