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目的
观察Twist沉默介导的间充质-上皮转化(MET)对乳腺癌干细胞特性的影响。
方法小干扰RNA(siRNA)转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后，采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测细胞中Twist及MET相关分子[Slug、Snail以及波形蛋白(Vimentin)]的mRNA和蛋白的表达；显微镜观察Twist沉默后细胞的形态变化；流式细胞仪检测CD44＋CD24－细胞比例；体外球体形成实验检测细胞自我更新能力；体内有限稀释实验检测细胞启动肿瘤能力。
结果si-Twist组与对照组比较，Twist基因的mRNA(0.24±0.04，P<0.01)和蛋白表达量明显降低；细胞表现为上皮样形态，排列规则、细胞间连接紧密、成团生长；间质相关分子Slug、Snail、Vimentin mRNA(0.25±0.05，P<0.01；0.34±0.03，P<0.01；0.44±0.04，P<0.01)和蛋白表达量明显降低；上皮标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin) mRNA(58.71±1.27，P<0.01)和蛋白表达量明显升高；肿瘤干细胞的百分比明显降低[(63.30±0.80)%比(86.50±0.70)%，P<0.01]；球体形成能力明显降低[(46.67±2.52)个比(109.67±2.52)个，P<0.01]；肿瘤起始细胞数目明显减少(1/122 851比1/20 064，P<0.01)。
结论MDA-MB-231细胞中Twist沉默后，细胞发生MET，体外自我更新和体内成瘤能力下降。