pBR322-Red介导的E．coil染色体基因敲入、位点及表达研究

来源 :遗传 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lg7519

【摘要】

：

应用pBR322-Red介导的重组工程系统，kan／sacB选择反选择系统，双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术，将长度为1653bp的luc报告基因分别敲入到E．coliW3110染色体facZ，lacy

【作者】

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陈伟李山虎于梅王鸣刚周建光

【机构】

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军事医学科学院生物工程研究所,厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室,广东药学院生命科学与生物制药学院,现工作单位广东药学院

【出处】

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遗传

【发表日期】

：

2006年1期

【关键词】

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pBR322-Red 重组工程基因敲入霍乱毒素B亚单位 pBR322-Red recombineering gene knock in Cholera

【基金项目】

：

军队“十五”医药卫生科学基金资助（编号：01MA089）

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应用pBR322-Red介导的重组工程系统，kan／sacB选择反选择系统，双链线性DNA重组技术和重叠引物介导的DNA重组技术，将长度为1653bp的luc报告基因分别敲入到E．coliW3110染色体facZ，lacy和facA基因的位置，建立了一系列具有新遗传表型的菌株：CWL2、CWL4和CWL6。荧光素酶分析表明，外源报告基因luc能在这3个结构基因处有效的组成型表达。为了进一步确定外源基因的表达情况，用霍乱毒素B亚单位基因ctxb替换了facZ基因，构建了新菌株CWDl。证明了以单拷贝形式存在

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