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目的
比较人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)18型E6蛋白与蛋白激酶R(PKR)对核因子NF-κB p65表达及磷酸化的调控作用。
方法分别构建靶向HPV18E6及PKR基因的短发夹结构RNA干扰序列的重组质粒载体,转染HeLa细胞,以实时荧光定量PCR法检测各组细胞HPV18E6、PKR及NF-κB p65 mRNA的表达,以Western Blot法检测各组细胞HPV18E6、PKR、NF-κB p65蛋白及后两者磷酸化型蛋白的表达,采用SPSS15.0软件包单因素方差分析及Newman-Keuls-q检验比较上述指标在各组间的表达差异。
结果在沉默HPV18E6基因表达的基础上,pSilencer-RNAi-E6转染组PKR mRNA、蛋白及磷酸化型蛋白的相对表达量均高于pSilencer-NC转染组及空白对照组(P<0.05),而NF-κB p65 mRNA、蛋白及磷酸化型蛋白的相对表达量均低于pSilencer-NC转染组及空白对照组(P<0.05);在沉默PKR基因表达的基础上,pSilencer-RNAi-PKR转染组NF-κB p65 mRNA、蛋白及磷酸化型蛋白的相对表达量与pSilencer-NC转染组及空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
结论HPV18 E6蛋白是HeLa细胞核因子NF-κB p65表达及磷酸化的主要调控者;PKR的表达及磷酸化均受到抑制,对NF-κB p65的调控作用弱。