【摘 要】
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为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载
【机 构】
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扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学江苏省动物预
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为构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白P27慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞LMH中的表达,试验以实验室前期构建的pcDNA3.1-p27为模板,扩增p27基因,克隆入pLVX-IRES-ZsGreen1载体,构建的重组质粒命名为pLVX-p27,与辅助质粒psPAX2和pMD2.G共转染至HEK293T细胞,包装获得表达p27基因的重组慢病毒.将慢病毒上清感染293T和LMH细胞,检测细胞中p27基因的转录水平和蛋白表达水平.结果显示:重组质粒pLVX-p27构建正确,收集的慢病毒上清滴度为9×104 TU/mL;实时荧光定量PCR、Western blot和共聚焦荧光试验结果显示P27蛋白主要定位于胞浆,p27基因的RNA和蛋白表达量在感染后96 h内随着感染时间延长逐渐升高.研究表明:表达p27基因的慢病毒包装成功,并且能感染293T及禽源LMH细胞,为进一步研究P27的生物学功能提供了工具.
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