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目的
将动脉插管方法应用于重组腺病毒(Ad. LacZ)介导的标记基因体内导入,观察标记基因在大鼠内脏中的转染效率和维持时间。
方法9组大鼠,7组于胃十二指肠动脉分别注入Ad.LacZ[2 ×109 pfu/ml(空斑形成单位/ml)]各1 ml, 2组注入单纯培养液各1 ml, 7组实验组分别于12h、18 h、72 h、7 d、14 d、21 d、28 d取动物的肝、脾、肺和肾脏, 2组对照组于7 d取上述脏器,采用β-半乳糖苷酶(X-Gal)染色方法检测LacZ基因在各个脏器的表达。
结果实验组于12 h取材,经染色LacZ基因在肝脏中即有表达,而此时脾、肺、肾等内脏器官尚未见表达;此后,18 h、72 h、7 d、14 d直至21 d该基因在肝脏仍有表达,而在其他脏器如脾、肺及肾表达仅维持14 d。对照组动物各个脏器皆无染色。
结论经动脉途径注入重组腺病毒,其体内的表达具有器官靶向性。如经此途径注人治疗性的目的基因重组腺病毒,其于肝脏表达产物出现时间早,并且持续时间较长。本实验结果为将来应用插管方法进行肝病基因治疗奠定了理论基础。