血小板生成素基因的克隆及在原核细胞的表达

来源 :西安医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangcwfq3
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目的克隆人血小板生成素(hTPO)基因,并使其在原核细胞中获得表达。方法先从人胚胎肝脏中提取总RNA,进行RI-PCR获得编码氨基端195个氨基酸残基的hTPO195 cDNA。将该片段亚克隆至pGEM-T easy克隆质粒中,以双脱氧链末端终止法对克隆质粒直接测序。接着将cDNA插入到原核表达质粒pET28-a中,转化大肠杆菌BLR21(DE3),进行诱导表达,以SDS-PAGE方法及免疫印迹法进行检测。结果得到的hTPO195cDNA与文献报道的序列完全一致。经诱导后hTPO基因在大肠杆菌中获得表达,目的蛋白占总菌体蛋白约10%,以免疫印迹法证实表达产物正确。结论得到cDNA,并在原核细胞中获得表达,得到截短形式的rhTPO195.
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