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摘 要 灵芝是一类木腐真菌，具有重要的药理价值，灵芝栽培方法研究能为实际应用提供技术支撑。本研究选择一株分离自海南五指山的灵芝进行室内栽培方法研究，并分析其出芝和菌盖形成的动态变化规律以及子实体的形态特征。结果表明，灵芝出芝动态具有显著的规律性，随着时间的进行，出芝逐渐减少；而菌盖形成没有明显的时间规律。此外，室内栽培灵芝出芝率及菌盖形成率较高，但子实体大小相对大田栽培灵芝小，反映了可通过增加栽培原料的营养成分提高灵芝子实体大小，为进一步推广应用室内栽培方法提供参考。
关键词 海南 ；Ganoderma sp. ；灵芝室内 ；栽培
分类号 S567.3+1 Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.02.005
Indoor Cultivation Technique of Ganoderma sp. Grown in Hainan
CHEN Yonggan1） QU Zhi2） CHEN Chuanping1）
LI Zhen1） FAN Pingjie1） MA Hongmei1） JIANG Fangyan1）
（1 College of Tropical Biology and Agronomy， Tropical Ocean College of Hainan，
Sanya， Hainan 572022， China；
2 Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology， CATAS， Haikou， Hainan 571101）
Abstract Ganoderma spp. is a kind of wood rotting fungi， which has important pharmacological value. The research on the cultivation method of Ganoderma spp. can provide the raw materials for the practical application. In this study， Wzh1 was chosen for indoor cultivation， and analyze the law of fruitbody and pilei producing， and evaluated the fruitbody morphology. The results showed that fruitbody producing decrease gradually along with the time. Additionally， comparing with the Ganoderma spp. cultivated in the field， the formation rate of fruitbody and pilei increased significantly， but the fruitbody was smaller. It reflected that it can add nutrients in the cultivation of raw materials to increase the size of the fruitibody， and further extending the indoor cultivation methods.
Keywords Hainan ； Ganoderma ； indoor ； cultivation
灵芝为腐生菌，常在阔叶树的倒木、枯木和树桩上生长。人工栽培条件下，需要碳源、氮源、矿物质等作为培养基原料[1]。由于培养基中含有木质素、纤维素、淀粉等碳水化合物及蛋白质等氮源物质，这些物质分子量较大，灵芝菌丝不易吸收，造成了灵芝生长缓慢及不易栽培成功[2]。
近40年来灵芝栽培技术得到广泛发展，其基本的方法是使灵芝菌丝体在室内发育到生理成熟阶段，然后将其移栽到室外，促进生长，最终产出质量较佳的子实体，这种技术有塑料袋、玻璃瓶及椴木露地栽培[3]。现今通过对水分、温度、酸碱度、光照、空气调节，已可实现在西北地区气候、资源环境条件下，鹿角灵芝的大棚栽培，并且规模化生产[4-6]，此外富锗灵芝、白鹤灵芝也已实现大田栽培。然而由于土地资源有限，加之控制环境条件需要大量的能源，一定程度上束缚了大田栽培技术的推广应用。
自60年代我国实现灵芝室内栽培以来，灵芝的人工栽培技术已得到长足的进步，然而传统灵芝栽培产量低，很难满足市场的需求，而且可实现室内栽培的灵芝种类少，特别是产自我国海南五指山的灵芝，其室内栽培方法更鲜有报道[7]。本研究选择一株分离自海南五指山的野生灵芝，通过控制环境条件探讨实现灵芝室内栽培的方法，以期为进一步推广应用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
菌株Wzs1为本课题组分离自海南五指山野生灵芝子实体，4℃保存于本实验室。
1.2 方法
1.2.1 菌种制备
培养基为锯术屑78%、麸皮20%、蔗糖和石膏各1%，混合料含水量在60%～65%（即手握料指缝间有水渗出又不滴下），将拌好的培养料装入瓶中压实。装至瓶肩处，内成平面，表面覆盖上薄层沙土，用直径1～1.5 cm的木棍在培养料中插出5 cm小洞，高温高压灭菌2 h。培养基灭菌完成之后，于无菌条件下接种，22～28℃培养。
1.2.2 灵芝室内栽培管理
栽培瓶置放于架上，菌丝生长阶段温度维持22～25℃，子实体生长阶段温度维持25～28℃，若温度高于28℃通风降温，叠放在一起培养瓶降低高度，疏散瓶距。子实体所处环境保持高湿度，在生长期，空气相对湿度增加到90%～92%。 1.2.3 灵芝采收及子实体观察
菌盖颜色由乳白色变成米黄色，再由米黄色变成红褐色时，利用锐刀沿菌柄底部切断，及时清理余下菌根，不伤及菌丝体以便二潮生长，观察采收的子实体形态特征。
2 结果与分析
2.1 灵芝生长的形态特征
接种完成后，灵芝菌丝在培养瓶中生长，当菌丝体长到一定阶段纠结形成原基，即生长进入原基期，形成肉眼可见的乳白色原基（图1A）。原基分化、膨大、不断向上生长形成菌柄，菌柄顶端再横向生长成菌盖（图1B）。当菌盖中出现菌管时，就能产生孢子，直到子实体完全成熟而干枯时停止生长（图1C）。
2.2 灵芝出芝动态变化
灵芝菌丝体长满瓶后转移到可控制温度的栽培室，将温度控制在25～28℃，使其适合子实体生长。本研究中以第1次观察到Wzs1出芝时间设为第1天，经历5 d后，达到峰值有33瓶出芝，随后出芝的数量逐渐减少，呈明显的下降趋势，进入17 d后没有出芝，表明Wzs1室内出芝时间段为16 d。见图2。
2.3 灵芝子实体菌盖形成动态
从出芝到子实体成熟这一阶段需要通风，防止室内CO2过高，阻碍菌盖成熟。灵芝菌盖形成时间点变化较大，没有稳定的时间点为菌盖形成高峰。此外，随着培养时间延长，菌盖形成也未成明显下降趋势，以第1次观察到Wzs1菌盖形成时间设为第1天，经历22 d后，菌盖形成停止。见图3。
2.4 灵芝子实体形态特征
随着菌盖生长，菌盖颜色由米黄色变成红褐色时，可用利刀沿菌柄底部切断，由于实验所栽培灵芝数量过多，随机抽取30个灵芝子实体测定形态特征，如表1。
3 讨论
灵芝子实体在17～33℃内可生长，低于20℃生长较慢[8]。本研究中室内栽培灵芝表明，灵芝培养温度以22～25℃较合适，子实体生长的适宜温度为25～28℃。菌丝生长阶段当室温达到25℃左右时，注意适当通风降温，使室温保持在22～25℃[9]。
灵芝菌丝和子实体生长需要充足氧气供给，一般菌丝生长阶段对氧气需求不高，但子实体生长更需要足够氧气供给，此时如果氧气供应充足，能促进子实体分化；如果CO2累积过多，子实体难以形成，生长缓慢[10]。空气中CO2含量对灵芝生长影响较大，CO2含量超过0.1%时，菌盖难以形成；而形成分支较多的“鹿角状”畸形；空气中CO2含量过高，子实体生长缓慢[11]。因此，为保证子实体生长对氧气的需要，当子实体原基形成时，加强培养室通风，根据气温高低缩短和延长通风时间。
本研究揭示了Wzh1灵芝出芝及菌盖形成的动态变化规律，结合灵芝生长环境条件要求，可在今后栽培工作中提前了解灵芝生长特征，有效控制环境条件变化，使其更适合灵芝的生长（图2、3）。本研究中灵芝菌盖直径为（1.57±0.51）cm，菌盖厚度为（0.89±0.09）cm。吕明亮等研究发现，大田栽培灵芝子实体菌盖直径大于8.6 cm，菌盖厚度大于1.1 cm。通过对比表明，本研究中室内栽培灵芝子实体明显小于大田栽培灵芝，这反映室内栽培灵芝在营养供给上的不足，因此对培养基成分及供给量均需改进，以期提高灵芝子实体品质[12]。
参考文献
[1] Shiao M S. Natural products of the medicinal fungus Ganoderma lucidum： occurrence， biological activities， and pharmacological functions. Chemical Record， 2003（3）： 172-180.
[2] Boh B M， Berovic J S， Lin Z B. Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds. Biotechnology Annual Review， 2007， 13： 265-301.
[3] 陈永敢，陈光宙，袁学军，等. 中国产Ganoderma lucidum的系统发育学分析及栽培技术研究. 北方园艺，2014（8）：92-96.
[4] 廖月葵，王乃平，谢丽莎. 白鹤灵芝栽培技术研究. 中国中药杂志，2007，32（4）：343-344.
[5] 石文权，贾 琦，尹兰霞，等. 鹿角灵芝栽培技术. 食用菌，2004（6）：27-29.
[6] 陆龙根，钱亚玲，吴立仁，等. 富锗灵芝栽培试验. 中国食用菌，1993（2）：20-21.
[7] 侯瑞宏，廖森泰. 我国灵芝人工栽培研究进展. 广东农业科学，2009（11）：29-32.
[8] 池小妹. 我国灵芝人工栽培技术研究现状. 时珍国医国药，2005，16（8）：791-792.
[9] 肖自添，谭志勇，叶耀程，等. 不同灵芝菌株产量比较试验. 广东农业科学，2010（10）：60-62.
关键词 海南 ；Ganoderma sp. ；灵芝室内 ；栽培
分类号 S567.3+1 Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.02.005
Indoor Cultivation Technique of Ganoderma sp. Grown in Hainan
CHEN Yonggan1） QU Zhi2） CHEN Chuanping1）
LI Zhen1） FAN Pingjie1） MA Hongmei1） JIANG Fangyan1）
（1 College of Tropical Biology and Agronomy， Tropical Ocean College of Hainan，
Sanya， Hainan 572022， China；
2 Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology， CATAS， Haikou， Hainan 571101）
Abstract Ganoderma spp. is a kind of wood rotting fungi， which has important pharmacological value. The research on the cultivation method of Ganoderma spp. can provide the raw materials for the practical application. In this study， Wzh1 was chosen for indoor cultivation， and analyze the law of fruitbody and pilei producing， and evaluated the fruitbody morphology. The results showed that fruitbody producing decrease gradually along with the time. Additionally， comparing with the Ganoderma spp. cultivated in the field， the formation rate of fruitbody and pilei increased significantly， but the fruitbody was smaller. It reflected that it can add nutrients in the cultivation of raw materials to increase the size of the fruitibody， and further extending the indoor cultivation methods.
Keywords Hainan ； Ganoderma ； indoor ； cultivation
灵芝为腐生菌，常在阔叶树的倒木、枯木和树桩上生长。人工栽培条件下，需要碳源、氮源、矿物质等作为培养基原料[1]。由于培养基中含有木质素、纤维素、淀粉等碳水化合物及蛋白质等氮源物质，这些物质分子量较大，灵芝菌丝不易吸收，造成了灵芝生长缓慢及不易栽培成功[2]。
近40年来灵芝栽培技术得到广泛发展，其基本的方法是使灵芝菌丝体在室内发育到生理成熟阶段，然后将其移栽到室外，促进生长，最终产出质量较佳的子实体，这种技术有塑料袋、玻璃瓶及椴木露地栽培[3]。现今通过对水分、温度、酸碱度、光照、空气调节，已可实现在西北地区气候、资源环境条件下，鹿角灵芝的大棚栽培，并且规模化生产[4-6]，此外富锗灵芝、白鹤灵芝也已实现大田栽培。然而由于土地资源有限，加之控制环境条件需要大量的能源，一定程度上束缚了大田栽培技术的推广应用。
自60年代我国实现灵芝室内栽培以来，灵芝的人工栽培技术已得到长足的进步，然而传统灵芝栽培产量低，很难满足市场的需求，而且可实现室内栽培的灵芝种类少，特别是产自我国海南五指山的灵芝，其室内栽培方法更鲜有报道[7]。本研究选择一株分离自海南五指山的野生灵芝，通过控制环境条件探讨实现灵芝室内栽培的方法，以期为进一步推广应用提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
菌株Wzs1为本课题组分离自海南五指山野生灵芝子实体，4℃保存于本实验室。
1.2 方法
1.2.1 菌种制备
培养基为锯术屑78%、麸皮20%、蔗糖和石膏各1%，混合料含水量在60%～65%（即手握料指缝间有水渗出又不滴下），将拌好的培养料装入瓶中压实。装至瓶肩处，内成平面，表面覆盖上薄层沙土，用直径1～1.5 cm的木棍在培养料中插出5 cm小洞，高温高压灭菌2 h。培养基灭菌完成之后，于无菌条件下接种，22～28℃培养。
1.2.2 灵芝室内栽培管理
栽培瓶置放于架上，菌丝生长阶段温度维持22～25℃，子实体生长阶段温度维持25～28℃，若温度高于28℃通风降温，叠放在一起培养瓶降低高度，疏散瓶距。子实体所处环境保持高湿度，在生长期，空气相对湿度增加到90%～92%。 1.2.3 灵芝采收及子实体观察
菌盖颜色由乳白色变成米黄色，再由米黄色变成红褐色时，利用锐刀沿菌柄底部切断，及时清理余下菌根，不伤及菌丝体以便二潮生长，观察采收的子实体形态特征。
2 结果与分析
2.1 灵芝生长的形态特征
接种完成后，灵芝菌丝在培养瓶中生长，当菌丝体长到一定阶段纠结形成原基，即生长进入原基期，形成肉眼可见的乳白色原基（图1A）。原基分化、膨大、不断向上生长形成菌柄，菌柄顶端再横向生长成菌盖（图1B）。当菌盖中出现菌管时，就能产生孢子，直到子实体完全成熟而干枯时停止生长（图1C）。
2.2 灵芝出芝动态变化
灵芝菌丝体长满瓶后转移到可控制温度的栽培室，将温度控制在25～28℃，使其适合子实体生长。本研究中以第1次观察到Wzs1出芝时间设为第1天，经历5 d后，达到峰值有33瓶出芝，随后出芝的数量逐渐减少，呈明显的下降趋势，进入17 d后没有出芝，表明Wzs1室内出芝时间段为16 d。见图2。
2.3 灵芝子实体菌盖形成动态
从出芝到子实体成熟这一阶段需要通风，防止室内CO2过高，阻碍菌盖成熟。灵芝菌盖形成时间点变化较大，没有稳定的时间点为菌盖形成高峰。此外，随着培养时间延长，菌盖形成也未成明显下降趋势，以第1次观察到Wzs1菌盖形成时间设为第1天，经历22 d后，菌盖形成停止。见图3。
2.4 灵芝子实体形态特征
随着菌盖生长，菌盖颜色由米黄色变成红褐色时，可用利刀沿菌柄底部切断，由于实验所栽培灵芝数量过多，随机抽取30个灵芝子实体测定形态特征，如表1。
3 讨论
灵芝子实体在17～33℃内可生长，低于20℃生长较慢[8]。本研究中室内栽培灵芝表明，灵芝培养温度以22～25℃较合适，子实体生长的适宜温度为25～28℃。菌丝生长阶段当室温达到25℃左右时，注意适当通风降温，使室温保持在22～25℃[9]。
灵芝菌丝和子实体生长需要充足氧气供给，一般菌丝生长阶段对氧气需求不高，但子实体生长更需要足够氧气供给，此时如果氧气供应充足，能促进子实体分化；如果CO2累积过多，子实体难以形成，生长缓慢[10]。空气中CO2含量对灵芝生长影响较大，CO2含量超过0.1%时，菌盖难以形成；而形成分支较多的“鹿角状”畸形；空气中CO2含量过高，子实体生长缓慢[11]。因此，为保证子实体生长对氧气的需要，当子实体原基形成时，加强培养室通风，根据气温高低缩短和延长通风时间。
本研究揭示了Wzh1灵芝出芝及菌盖形成的动态变化规律，结合灵芝生长环境条件要求，可在今后栽培工作中提前了解灵芝生长特征，有效控制环境条件变化，使其更适合灵芝的生长（图2、3）。本研究中灵芝菌盖直径为（1.57±0.51）cm，菌盖厚度为（0.89±0.09）cm。吕明亮等研究发现，大田栽培灵芝子实体菌盖直径大于8.6 cm，菌盖厚度大于1.1 cm。通过对比表明，本研究中室内栽培灵芝子实体明显小于大田栽培灵芝，这反映室内栽培灵芝在营养供给上的不足，因此对培养基成分及供给量均需改进，以期提高灵芝子实体品质[12]。
参考文献
[1] Shiao M S. Natural products of the medicinal fungus Ganoderma lucidum： occurrence， biological activities， and pharmacological functions. Chemical Record， 2003（3）： 172-180.
[2] Boh B M， Berovic J S， Lin Z B. Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds. Biotechnology Annual Review， 2007， 13： 265-301.
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[8] 池小妹. 我国灵芝人工栽培技术研究现状. 时珍国医国药，2005，16（8）：791-792.
[9] 肖自添，谭志勇，叶耀程，等. 不同灵芝菌株产量比较试验. 广东农业科学，2010（10）：60-62.