氯霉素间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法的建立

来源 :中国兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:RIshan
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以人工合成的氯霉素 -牛血清白蛋白 (CAP- BSA)为包被抗原 ,氯霉素 (CAP)为竞争半抗原 ,两者与一定量的抗CAP- Mc Ab反应。结果表明 ,理想的包被抗原质量浓度为 1.2 5 mg/ L ,抗 CAP- Mc Ab稀释倍数为 1∶ 12 0 0 0 ,酶标二抗稀释倍数为 1∶ 5 0 0 0 ,最适检测范围为 1~ 10 0 μg/ L,最小检测量为 0 .1μg/ L,批内和批间变异系数分别为 3.6 2 %和 5 .19%。得到回归方程 (y =1.2 730 - 0 .6 74 5 x,r2 =0 .9779)和标准曲线 ,从而建立了快速定量测定 CAP含量的间接竞争酶联免疫吸附试验 (ci EL ISA)。 Synthetic chloramphenicol-bovine serum albumin (CAP-BSA) was used as coating antigen, and chloramphenicol (CAP) was a competitive hapten, both of which reacted with a certain amount of anti-CAP-McAbs. The results showed that the optimal concentration of coated antigen was 1.2 5 mg / L, the dilution of anti-CAP-Mc Ab was 1:12 0 0 0, and the dilution of enzyme-labeled secondary antibody was 1:50 000. The optimal detection range Was 1 ~ 100 μg / L, the minimum detection limit was 0.1 μg / L, and the coefficient of variation (CV) within and between batches were 3.6 2% and 5.91%, respectively. The regression equation (y = 1.2 730 - 0.674 5 x, r2 = 0.9779) and the standard curve were obtained. The indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ci ELISA) was established for the rapid quantitative determination of CAP.
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