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以4型腺病毒疫苗株感染A549细胞，提取病毒DNA，将EcoRI消化的D片段（70.5-83.0基因图谱单位）克隆入pUC18质粒，得pAd4（70.5-83）质粒，质粒pAd4（70.5-83）和pAd4Cl25经酶切、系列亚克隆、加接头等方法得到大部分和部分缺失E3区的重组质粒。聚合酶链反应（PCR）法获得poly（A），构建约800bp腺病毒晚期表达盒，在所构建的腺病毒重组质粒E3缺失区或E4与ITR间插入表达盒，得到可同时表达2个或2个以上外源基因和保留了E3区编码分子量为19 300糖蛋白基因的3种Ad4载体。将lacZ基因插入载体表达区，与Bcl I消化的Ad4DNA A片段共转染A549细胞，ONPG法检测证实所构建的载体和表达盒功能良好。本项工作对于在国内研究口服活疫苗及开展基因治疗均具有重要意义。