【摘 要】
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目的利用3种不同组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)si RNA转染大鼠系膜细胞,建立高效、稳定的TIMP-1低表达系膜细胞模型,为肾疾病研
【机 构】
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解放军总医院肾病科、肾脏疾病国家重点实验室、国家慢性肾病临床医学研究中心
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目的利用3种不同组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,TIMP-1)si RNA转染大鼠系膜细胞,建立高效、稳定的TIMP-1低表达系膜细胞模型,为肾疾病研究奠定实验基础。方法分别设计合成3条TIMP-1特异性si RNA序列,并以标记了绿色荧光基团6-羧基荧光素(6-carboxy-fluorescein,FAM)的无义si RNA作为对照,利用脂质体转染方法转染原代大鼠系膜细胞,收集转染后48 h的细胞,利用荧光显微镜观察绿色荧光,明确其转染成功率;同时用Trizol法分离提取系膜细胞的总RNA,利用Taqman探针方法检测试验组及对照组TIMP-1的m RNA表达水平。结果荧光显微镜观察,利用脂质体转染方法,si RNA转染效率可以达到90%以上;Taqman探针荧光定量PCR结果显示,3种不同序列的si RNA均有抑制TIMP-1表达的作用(P<0.01),且si TIMP1-1的效果最佳。结论本研究利用si RNA转染技术,成功建立了TIMP-1低表达系膜细胞模型。
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