【摘 要】
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目的 初步探讨血管生成抑制因子arresten在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达及其生物学效应.方法 用脂质体转染法将真核表达载体pSecTag-arresten导入CHO,抗生素Zeocin筛选获得
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目的 初步探讨血管生成抑制因子arresten在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达及其生物学效应.方法 用脂质体转染法将真核表达载体pSecTag-arresten导入CHO,抗生素Zeocin筛选获得阳性克隆.RT-PCR检测arresten在mRNA水平的表达,Western blot检测arresten在蛋白水平的表达.将人脐静脉内皮细胞(huvec)分为加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组及加含arresten的上清培养液组,Transwell小室检测arresten对huvec细胞迁移的影响,Matrigel胶体外管腔生成试验检测arresten对huvec细胞血管形成能力的影响.结果 RT-PCR和Western blot检测显示,arresten在mRNA水平与蛋白水平均有表达.迁移抑制曲线显示,含arresten组的迁移抑制率明显高于对照组(P＜0.05).加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组和加含arresten的上清培养液组细胞形成的血管腔分别为16±2、13±1和7±2个,加含arresten的上清培养液组显著低于其他两组(P＜0.05).提示arresten对huvec细胞的迁移和血管形成具有抑制作用.结论 成功构建arresten的真核表达体系,并发现arresten因子可抑制huvec细胞迁移和管腔形成,这可能是其抑制血管生成的途径之一.
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