【摘 要】
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目的构建HBx表达载体,筛选可稳定表达HBx的人肝细胞(HL)-7702细胞系。方法采用RT-PCR法扩增HBx基因片段,并将其连接至pIRES载体,经酶切和测序鉴定pIRES-HBx重组质粒序列。然
【机 构】
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首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(编号:81773168),北京市医院管理局青年人才培养“青苗”计划项目(编号:QML20171701),北京市肝病研究所所内基金资助项目(编号:2018-1-1/2018-4-7/Y-2019-1TD)
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目的构建HBx表达载体,筛选可稳定表达HBx的人肝细胞(HL)-7702细胞系。方法采用RT-PCR法扩增HBx基因片段,并将其连接至pIRES载体,经酶切和测序鉴定pIRES-HBx重组质粒序列。然后,分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测验证重组质粒的正确性。最后,应用G418抗生素筛选稳定表达HBx的HL-7702细胞系。结果经PCR扩增得到正确的HBx片段,成功构建pIRES-HBx质粒,将重组质粒转染HEK 293细胞和HL-7702细胞均实现了HBx过量表达;经免
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