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【摘 要】目的：本文研究了Notch信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9, BMP9)诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化过程中的作用及其机制。方法：将细胞分为5组：空白组(Blank, n=3)，BMP9处理组(BMP9, n=3)，空白质粒对照组(BMP9+Control, n=3)，过表达Notch1胞内段质粒(Notch1 intracellular domain, NICD)处理组(BMP9+NICD, n=3)，DAPT处理组(BMP+DAPT, n=3)。通过碱性磷酸酶(alkaline?phosphatase, ALP)染色和钙盐染色分别验证过表达NICD对成骨分化早晚期情况的影响。进一步采用定量逆转录PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-RCR)和Western blot检测基因NICD、Hey1及成骨相关基因Smad-1/5/8、p-Smad-1/5/8、OPN、Runx2、OCN、JunB的表达。结果：早期ALP活性及染色结果显示，NICD组较Control组能显著抑制C3H10T1/2细胞成骨分化过程中ALP的形成[5 d: (33167.66±2018.45) vs. (146451.00±14889.67), P=0.000; 7 d: (58981.33±4724.70) vs. (89588.66±5928.32), P=0.000]，γ-分泌酶抑制剂(N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester, DAPT)完全抑制Notch通路时得到相同的结果[5 d: (44812.66±4174.94) vs. (146451.00±14889.67), P=0.000; 7 d: (64622.93±4724.70) vs. (89588.66±5928.32), P=0.000]。茜素红S染色结果显示，NCID抑制钙盐结节的形成，而DAPT阻断Notch通路明显促进钙盐结节形成。qRT-PCR结果表明，NCID组中NICD及靶基因Hey1的表达较Control组明显增加[(3.90±0.02) vs. (0.35±0.01), P=0.000; (19.79±0.01) vs. (11.80±0.02), P=0.000], WB得到相同结果[(1.32±0.01) vs. (0.19±0.01), P=0.000]，且NICD明显抑制成骨分化相关基因JunB、Runx2、OCN、OPN等的表达[(0.10±0.01) vs. (0.53±0.01), P=0.000; (0.18±0.01) vs. (0.30±0.02), P=0.000; (0.36±0.01) vs. (0.62±0.02), P=0.000; (0.07±0.01) vs. (0.48±0.01), P=0.000]，而转录因子Smad-1/5/8、p-Smad-1/5/8的表达不受影响[(0.74±0.02) vs. (0.73±0.03), P=0.000; (0.63±0.01) vs. (0.58±0.04), P=0.000]，DAPT阻断Notch通路后上述相关基因的表达明显增加。结论：本实验结果首次证明，NICD激活Notch通路对BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的抑制作用可能是通过抑制JunB基因发挥作用，而非调控BMP9/Smad(bonemorphogenetic protein 9/drosophila mothers against decapentaplegic)信号通路。