【摘 要】
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目的 观察新型免疫抑制剂FTY720对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用及其对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,以探讨其作用机制.方法 体外培养大鼠GMC,加
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科, 武汉,430030武汉市中心医院药学部;
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目的 观察新型免疫抑制剂FTY720对体外培养的正常大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的促凋亡作用及其对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响,以探讨其作用机制.方法 体外培养大鼠GMC,加入20 μmol/L FTY720,分别作用6 h、12 h、24 h、48 h后,以MTT法检测GMC增殖情况;流式细胞术检测GMC凋亡;Hoechst33258和PI染色观察凋亡细胞形态变化;琼脂糖DNA凝胶电泳法观察凋亡细胞核小体DNA的断裂现象.并通过SuperArray实时定量PCR细胞周期基因芯片测定FTY720对细胞周期调节蛋白基因表达谱的影响.结果 加入FYY720培养6 h后,流式细胞术检测发现,GMC出现典型细胞凋亡的亚二倍体峰;12 h后Hoechst33258和PI荧光染色观察发现亮蓝色的凋亡小体,且开始出现典型细胞凋亡形态改变;24 h后DNA琼脂糖凝胶电泳可见凋亡梯度的出现.随FTY720作用时间延长,细胞凋亡明显增加,不同时间组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P
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