Smad4真核表达质粒的构建及转染结肠癌细胞系SW480

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目的构建Smad4真核表达质粒并筛选稳定表达野生型Smad4基因的SW480结肠癌细胞系。方法提取正常人体胎盘组织总RNA,PCR扩增人野生型Smad4基因,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1(+)真核表达载体上,构建peDNA3.1(+)-Smad4重组质粒,通过PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定,脂质体介导方法转染结肠癌细胞系SW480,G418筛选稳定表达株,RT—PCR方法检测其mRNA表达水平。结果Smad4基因的PCR电泳结果显示在1700bp左右
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