探讨肝细胞核因子4α(HNF4α)在鹅脱氧胆酸(CDCA)诱导的胃黏膜肠上皮化生中的作用与机制。
方法以不同浓度的CDCA刺激人永生化胃黏膜上皮细胞GES-1后，采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测GES-1和人胃癌细胞系(AGS、SGC7901、BGC823)中HNF4α、尾侧同源盒转录因子2(CDX2)和三叶肽因子家族3(TFF3)的mRNA和蛋白质表达变化。用HNF4α短发夹RNA和对照短发夹RNA分别转染GES-1后，以CDCA刺激，采用蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2和TFF3的蛋白质表达。采用慢病毒感染的方法，分别在GES-1和SGC7901中过表达HNF4α，在BGC823和AGS中静默HNF4α，以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测HNF4α、CDX2、TFF3的mRNA和蛋白质表达。采用荧光素酶报告基因实验分析HNF4α对CDX2的调控作用。统计学分析采用t检验。
结果GES-1、SGC7901、BGC823和AGS的HNF4α mRNA水平分别为1.00±0.12、263.01±10.23、848.01±18.13和3 049.86±91.75；其中AGS、BGC823和SGC7901的HNF4α mRNA水平均高于GES-1，差异均有统计学意义(t＝33.23、46.72、25.62，P均<0.01)；AGS、BGC823、SGC7901和GES-1的HNF4α蛋白质表达与mRNA表达一致。转染HNF4α短发夹RNA组的CDX2和TFF3蛋白质表达低于未转染HNF4α短发夹RNA组。在GES-1细胞中，过表达HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为16 281.839±1 843.017、6.275±0.137和17.310±1.533，分别高于过表达对照组的1.000±0.048、1.000±0.012和1.000±0.108，差异均有统计学意义(t＝8.83、38.29、10.61，P均<0.01)；在AGS细胞中，静默HNF4α组HNF4α、CDX2和TFF3的mRNA水平分别为0.021±0.001、0.088±0.007和0.074±0.002，分别低于静默对照组的1.000±0.108、1.000±0.131和1.000±0.122，差异均有统计学意义(t＝9.09、6.93、7.57，P均<0.01)；在GES-1过表达细胞和AGS静默细胞中，HNF4α、CDX2、TFF3的蛋白质表达与mRNA表达一致。在克隆有CDX2-1(－2 000～－1 bp)和CDX2-2(－1 510～1 bp)启动子的双报告质粒中，小干扰HNF4α后的活性分别为0.387±0.013和0.533±0.040，分别低于小干扰对照组的0.605±0.012和0.882±0.019，差异均有统计学意义(t＝21.49、13.53，P均<0.01)。
结论HNF4α可能是通过上调CDX2的表达参与胆汁酸介导的胃黏膜肠上皮化生的发生。