【摘 要】
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[目的]糖基转移酶UGT94E5和UGT75L6催化栀子果实中西红花总苷生物合成途径的末端步骤。该研究利用重叠延伸PCR法,合成编码这两个酶的基因序列。[方法]首先将基因分段,每段两
【机 构】
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江西中医药大学; 江西民族传统药现代科技与产业发展协同创新中心; 江西省中药种质资源工程技术研究中心; 广西钦州学院海洋学院;
【基金项目】
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江西省卫生厅中医药科研基金课题(“栀子糖基转移酶基因的克隆与功能分析”,No.2012A142);国家自然科学基金项目(“栀子果实中西红花总苷合成途径CCD基因的筛选与功能分析”,No.31360362);江西省自然科学基金项目(“栀子玉米黄素剪切加双氧酶基因的克隆与功能分析”,No.20122BAB205070)资助~~
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[目的]糖基转移酶UGT94E5和UGT75L6催化栀子果实中西红花总苷生物合成途径的末端步骤。该研究利用重叠延伸PCR法,合成编码这两个酶的基因序列。[方法]首先将基因分段,每段两端均加上p UC57载体的多克隆位点作为接头,拼接成800 bp以下的片段,再输入到DNAWorks软件中,获得最优寡核苷酸片段组合;将合成的寡核苷酸片段混合,用作模板,进行两次PCR扩增,获得加了接头的各段序列,亚克隆到自制的p UC57 T载体上。酶切后回收插入片段,混合,用作模板,扩增全长基因,产物克隆到自制的p UC57 T载体上。[结果]成功合成了栀子Gj UGT9(编码UGT94E5)和Gj UGT1(编码UGT75L6)基因,分别长1 496 bp和1 583 bp。[结论]重叠延伸PCR法能够有效地合成栀子两个糖基转移酶基因序列,为遗传操作奠定了基础。
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