【摘 要】
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外泌几丁质酶在溶珊瑚弧菌生活史中发挥重要作用.本研究从蛋白质序列角度分析了多种来源于溶珊瑚弧菌的几丁质酶,并选其中蛋白质结构相对简单,容易进行序列改造和大肠杆菌重组表达、纯化的几丁质酶开展研究:(1)在保留野生型弧菌C端几丁质结合域的同时,N段增加陆生微生物几丁质结合域;(2)获得高表达重组几丁质酶的大肠杆菌菌株,采用一步层析柱工艺,重组蛋白纯度达90％以上;(3)不经过复杂脱盐换液处理,几丁质酶活性仍维持较高水平.经过对以上条件的优化,本研究确立了几丁质酶重组表达的工艺路线,分析了此重组酶活性匹配的含盐
【机 构】
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上海农林职业技术学院,上海 201699;华南农业大学资源环境学院,广东广州 510642
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外泌几丁质酶在溶珊瑚弧菌生活史中发挥重要作用.本研究从蛋白质序列角度分析了多种来源于溶珊瑚弧菌的几丁质酶,并选其中蛋白质结构相对简单,容易进行序列改造和大肠杆菌重组表达、纯化的几丁质酶开展研究:(1)在保留野生型弧菌C端几丁质结合域的同时,N段增加陆生微生物几丁质结合域;(2)获得高表达重组几丁质酶的大肠杆菌菌株,采用一步层析柱工艺,重组蛋白纯度达90％以上;(3)不经过复杂脱盐换液处理,几丁质酶活性仍维持较高水平.经过对以上条件的优化,本研究确立了几丁质酶重组表达的工艺路线,分析了此重组酶活性匹配的含盐缓冲液条件,为今后几丁质酶大规模生产积累理论研究基础.
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