HAI-1对肾细胞癌细胞自噬及凋亡调控的初步研究

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[目的]研究肝细胞生长因子激活因子1型抑制因子(hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1,HAL1)对肾细胞癌细胞自噬和凋亡的影响,探讨其发挥作用的可能机制.[方法]QRT-PCR检测HAI-1在肾细胞癌组织和细胞系中的表达水平,选择低表达的肾细胞癌细胞系进行HAI-1过表达质粒的转染,分为对照组(NC组)和过表达质粒组(OE-HAI-1组).QRT-PCR检测NC组和OE-HAI-1组细胞中HAI-1的表达水平;MTS实验检测NC组和OE-HAI-1组细胞的增殖率;Western blot法检测HAI-1对肾细胞癌细胞中自噬相关蛋白表达水平的影响;流式细胞仪检测NC组和OE-HAI-1组细胞凋亡率;Western blot法检测NC组和OE-HAI-1组细胞中caspase3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平.[结果] QRT-PCR结果显示HAI-1在肾细胞癌组织中的表达低于其在癌旁组织中的表达,HAI-1在肾细胞癌细胞系ACHN、786-O和A-498中的表达低于其在肾小管上皮细胞HK-2中的表达(P<0.05).选择HAI-1表达最低的肾细胞癌细胞系786-O转染HAI-1过表达质粒,qRT-PCR结果显示OE-HAI-1组细胞中HAI-1的表达增加(P<0.05);与NC组相比,OE-HAI-1组786-O细胞增殖能力下降.与NC组比较,OE-HAI-1组和加入自噬激活剂Rapamycin的OE-HAI-1 +Rapamycin组细胞中Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达降低,LC3-Ⅰ蛋白表达增加.与OE-HAI-1组相比,OE-HAI-1 +Rapamycin组Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达增加,LC3-Ⅰ蛋白表达降低.与NC组相比,OE-HAI组细胞凋亡增加,细胞中caspase3和Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白的表达降低.[结论]HAI-1在肾细胞癌组织和细胞系中表达降低,并促进肾细胞癌细胞自噬和凋亡的发生.HAI-1可能是治疗肾细胞癌的候选分子靶标.
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